研究目的本研究通过体外细胞实验,运用分子生物学,血清药理学等现代实验技术,从HPA轴和血脑屏障相关蛋白、基因GR和Occludin变化的角度,探讨调肝方药逍遥散对慢性应激体外血脑屏障(Blood brain barrier,BBB)的影响作用及调控机制。实验方法构建RBMEC-RA共培养细胞模型,并以皮质酮干预造成抑郁症体外BBB损伤模型的。以Na-FLU通透性测定法,鉴定BBB模型构建是否成功。把成功构建的BBB模型分为6组:正常组、模型组(Chronic Stress CS)、低剂量逍遥散组(CS+Low-XYS)、中剂量逍遥散组(CS+Middle-XYS)、高剂量逍遥散组(CS+High-XYS)、糖皮质激素受体阻断剂组(CS+Ru-38486)。分组药物干预之后,用CCK-8法,跨膜电阻测定法,HRP流量测定法,ELISA法测定血脑屏障细胞活性,LDH值,TEER值、HRP 流量、ALP 水平、γ-GT 水平的变化;用 Western-blot、RT-PCR 检测 GR 和 Occludin的蛋白及mRNA水平。实验结果1.RBMEC-RA共培养模型与单层RBMEC模型对比,其通透率更低,而且在正常状态下,无皮质酮应激损伤的情况下,RBMEC-RA共培养模型的细胞跨膜电阻TEER,BBB的两种特征性酶ALP、γ-GT表达都处于较高水平;2.在皮质酮应激损伤下,血脑屏障的细胞活性、TEER值、ALP和γ-GT水平都明显降低,LDH值和HRP流量明显升高,GR的蛋白和mRNA水平在胞浆内表达降低,在细胞核内升高,Occludin蛋白和mRNA水平表达降低;3.逍遥散能够升高抑郁症体外BBB损伤模型的细胞活性,TEER值、ALP和y-GT表达水平,降低LDH值和HRP流量,升高胞浆内GR蛋白和mRNA表达水平,降低细胞核内表达水平,升高Occludin蛋白和mRNA表达水平,其中高剂量的逍遥散效果接近Ru-3 8486阳性组。结论皮质酮干预造成抑郁症体外BBB损伤模型的结构与功能受损,通透性提高。逍遥散可以改善BBB受损结构与功能,其作用机制可能基于逍遥散可通过增强GR活性,上调Occludin表达,修复受损BBB结构与功能,从而发挥抗抑郁作用。