论文部分内容阅读
目的观察慢性不可预见性温和应激(chronic unpredicted mild stress,CUMS)对大鼠海马星形胶质细胞凋亡的影响。方法将90只健康成年雄性SD大鼠随机分为对照组和模型组(n=45)。采用慢性不可预见性温和应激制备大鼠抑郁症模型。应激共包括11种:4℃冰水游泳5min,鼠笼45°倾斜24h,双耳电击5s两次(0.8m A),禁食24h,持续光照24h,42℃热水游泳5min,束缚2h,潮湿垫料24h,夹尾90s,禁水24h,鼠笼摇动15min。在28天内每天随机选取一种刺激方式,要求同种、同类刺激不连续出现。对照组大鼠每天正常抓取一次,不做其他特殊处理。在应激结束后,采用糖水偏好实验、旷场实验和Morris水迷宫实验对大鼠进行行为学检测,分别于造模后1d、7d和14d处死大鼠,对照组大鼠处死时间和模型组相同。采用免疫印迹方法检测大鼠海马组织中的促凋亡蛋白和抑凋亡蛋白的表达水平;采用激光共聚焦方法分别观察大鼠海马中胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)和Bax,GFAP和Bcl-2,GFAP和Caspase-3的共定位表达情况。应用SPSS 17.0统计学软件对本实验所得数据进行统计分析,以P<0.05表示差异有统计学意义。结果1糖水偏好实验:对照组和模型组大鼠普通水消耗量无显著差异(P>0.05),模型组大鼠糖水消耗量和糖水偏好百分比均低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.01)。2旷场实验:与对照组相比,模型组大鼠行走总路程、中央活动时间、直立次数和修饰行为次数均显著降低,差异具有统计学意义(P<0.01)。3 Morris水迷宫实验:模型组大鼠平均逃避潜伏期(escape latency,EL)高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.01)。4 Western blot检测结果:根据条带分析显示,与对照组比较,CUMS后1d,7d,14d大鼠海马Bax、Caspase-3蛋白表达水平升高,7d时升高最明显,差异具有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,CUMS后1d,7d,14d大鼠海马Bcl-2蛋白表达水平均下降(P<0.05)。5免疫荧光双标结果:GFAP、Bax检测结果显示:GFAP为Alexa Fluor 488激发的绿色荧光,Bax为Alexa Fluor 594激发的红色荧光,图像融合后可见黄色荧光,说明GFAP和Bax可同时表达;与对照组比较,CUMS 7d组大鼠海马Bax阳性细胞数及荧光融合显著增多。GFAP、Bcl-2检测结果显示:GFAP为Alexa Fluor 488激发的绿色荧光,Bcl-2为Alexa Fluor 594激发的红色荧光,图像融合后可见黄色荧光,表明GFAP和Bcl-2同时表达;与对照组比较,CUMS 7d组大鼠海马Bcl-2阳性细胞数及荧光融合显著减少。GFAP、Caspase-3检测结果显示:GFAP为Alexa Fluor 488激发的绿色荧光,Caspase-3为Alexa Fluor 594激发的红色荧光,图像融合后可见黄色荧光,说明GFAP和Caspase-3同时表达;CUMS 7d组大鼠海马Caspase-3阳性细胞数及荧光融合较对照组显著增多。结论1给予大鼠CUMS成功的建立了抑郁症动物模型;2经CUMS后,大鼠海马存在凋亡现象;3凋亡相关蛋白与星形胶质细胞特异性标志蛋白存在共定位表达,提示星形胶质细胞中凋亡增强,这可能是影响抑郁大鼠海马体积的原因之一。