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十字花科黑斑病的泛滥,给大白菜与甘蓝等作物造成严重的经济损失。该病主要由芸薹生链格孢菌(Alternaria brassicicola)引起。该菌在自然界中分布十分广泛,寄主范围广,对环境有很强的适应能力。国内外对芸薹链格孢菌(A.brassicicola)的研究主要是研究寄主的抗性与综合防治。最关键的是从真菌病害的致病机制去解决问题。本文研究了Zn2Cys6转录因子Ab0009,主要以芸薹生链格孢(A.brassicicola)为研究对象,成功克隆了Ab0009基因,构建了基因缺失的载体,对芸薹生链格孢原生质体转化并成功筛选得到Ab0009基因缺失突变体,之后进行了基因突变体的回补试验得到互补体,对三者进行对比研究。主要结果如下:利用稻瘟菌(Magnaporthe grisea)转录因子GCC1为查询序列,从NCBI上下载芸薹生链格孢(A.brassicicola)ATCC96836的全基因组序列进行Tblastn。经克隆和测序发现A.brassicicola中Ab0009基因大小为2071bp,其中内含子1个,大小为58bp,且符合GT-AG法则,编码670个氨基酸。在NCBI网站上对Ab0009基因预测蛋白进行保守区序列分析和同源性序列分析。根据芸薹生链格孢Ab0009基因序列设计特异性引物Ab0009-f和Ab0009-r通过PCR技术扩增Ab0009基因。以PMD18-T转大肠杆菌构建Ab0009基因的打靶载体,进行野生菌原生质体的转化。挑取在含有潮霉素的PDA平板上长出的转化子进行PCR验证,并进一步利用RT-PCR方法验证出Ab0009基因缺失突变体中Ab0009基因已经缺失不能成功表达,通过Southern杂交验证得出基因插入为单拷贝同源重组。以pCB1532质粒为载体,对Ab0009基因缺失突变体原生质体进行转化,构建Ab0009基因的互补体,并以氯嘧磺隆为筛选标记互补体。对野生菌、Ab0009基因缺失突变体及Ab0009基因缺失突变体的互补体在菌落表型、菌丝和分生孢子形态、渗透氧化胁迫以及致病性检测进行对比研究,结果如下:Ab0009基因缺失突变体在PDA培养基上的生长速度慢于野生菌,不能产生分生孢子,菌丝节间突出明显;在菌丝颜色上,Ab0009基因缺失突变体菌丝表现为灰白色;Ab0009基因缺失突变体在PDA+蔗糖的培养基上生长速度最快,菌丝颜色为中褐色表现;在含KCl的PDA培养基中生长速度比含NaCl的PDA培养基稍快,菌丝颜色比较上均为中褐色表现;在含有山梨醇与甘露醇的培养基中生长速度接近等同,且在菌丝颜色上为灰白色表现;基因缺失突变体致病性依然存在,但相比于野生菌致病力减弱。Ab0009基因缺失突变体的互补体菌株已基本恢复野生菌水平。