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目的:在验证及改良小鼠成骨细胞原代培养常用方法的基础上,分别从蛋白质及其mRNA表达水平检测不同剂量氟对小鼠成骨细胞中Ras基因的影响;同时检测不同剂量氟对人成骨细胞中RasmRNA表达量的影响。方法:建立与改良小鼠成骨细胞的原代培养方法,通过碱性磷酸酶和钙结节染色方法进行细胞来源鉴定;染氟剂量分别为:0mg╱L、2.5mg/L、5mg╱L、10mg/L和20mg╱L;利用免疫组化、原位杂交、免疫印记和RT-PCR(reverse transcri ption polymerase chain reaction)的方法检测染氟后小鼠成骨细胞中Ras蛋白及mRNA表达水平;采用Real Time RT-PCR的方法测定染氟后人成骨细胞内RasmRNA表达量的变化。结果:改良后的细胞培养方法重复性好、成骨细胞生长稳定、纯化效果好,完全适和建立氟中毒的体外模型。小鼠成骨细胞染氟10天后,免疫组化和原位杂交结果显示:对照组、2.5mg╱L染氟组及5.0mg/L染氟组成骨细胞中Ras基因均有较强阳性表达,但10.0mg/L、20.0mg╱L染氟组的成骨细胞Ras基因则为弱阳性表达;2.5mg╱L组与对照组比较,2.5mg/L组的阳性强度高于对照组,表达范围也明显大于对照组;而其余各染氟组与对照组比较,阳性强度低于对照组,表达范围也明显小于对照组。阳性细胞计数结果显示:各染氟组阳性表达细胞数与对照组比较有统计学差异(P＜0.05),2.5mg/L染氟组高于对照组,其它染氟组低于对照组;2.5mg/L和5.0mg╱L染氟组阳性细胞数高于其它染氟组(P＜0.05),2.5mg/L组阳性细胞数最高。小鼠成骨细胞的RasmRNA相对定量结果显示:2.5mg/L染氟组高于对照组,其它染氟组均少于对照组;同时2.5mg/L染氟组大于其它染氟组;染氟组的RasmRNA相对定量有随着剂量增加而逐渐降低的趋势。小鼠成骨细胞的Ras蛋白相对定量结果显示:2.5mg/L与5.0mg/L染氟组蛋白相对定量大于对照组,其它染氟组均小于对照组;同时5mg╱L染氟组蛋白相对定量大于其它染氟组。人成骨细胞中RasmRNA相对定量显示:2.5mg/L及以上剂量氟作用下人的成骨细胞中RasmRNA相对定量小于对照组。结论:氟作用于小鼠成骨细胞后可以影响小鼠成骨细胞的Ras基因蛋白及mRNA的表达,表现为双向作用即低剂量的氟对Ras基因蛋白及mRNA表达有促进作用,高剂量的氟抑制Ras基因蛋白及mRNA表达。氟作用于人成骨细胞后可以影响人成骨细胞的RasmRNA的表达,本实验剂量中表现为RasmRNA表达量随着剂量增加而减少。