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抗菌肽是特定基因编码产生的一类小分子多肽,结构和组成复杂多样,是生物天然免疫的重要组成部分。抗菌肽因具有独特的抗菌机制、广谱的杀菌作用、高效的抗菌活性以及靶菌株难以产生抗性等优点而倍受关注。近年来抗菌肽的开发与应用已经成为研究的热点。目前,在多个物种(如昆虫、哺乳动物、两栖动物等)中都发现了大量抗菌肽,而淡水鱼类中发现的抗菌肽并不是很多。本实验的目的是分离和研究新的鱼类抗菌肽基因,并对抗菌肽结构、功能和作用机理进行分析,为后续的新型抗菌肽的设计和表达奠定基础。
为得到抗菌肽基因序列,我们先用嗜水气单胞菌诱导彭泽鲫鱼产生免疫反应,并提取鱼肝脏的RNA,接着通过DDRT-PCR找到差异条带,选择150bp左右的差异条带进行扩增并测序,然后根据测序结果设计引物用RACE的方法找到差异片段所在基因的全长。
我们用2条锚定引物和8条随机引物组合进行DDRT-PCR,找到多条差异条带,选取了最有可能的条带进行测序,最后得到了4条序列(CF-11、CF-2、CF-3、CF-4)。序列比对分析表明,CF-1和CF-2在进化中较保守,广泛存在于不同的生物中。CF-4在Otolemurgarnetti中有同源序列。这三条序列的功能目前尚未报道,它们可能是彭泽鲫鱼中存在的新的抗菌肽基因序列。