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本试验通过不同浓度的乙醇分级、除蛋白、柱层析等方法制备出金针菇菇脚(Flammulina velutipes stembase)多糖,探讨分级的乙醇浓度及纯化程度对金针菇菇脚多糖的体外抗氧化活性的影响;同时研究了金针菇菇脚粉(FVS)和金针菇菇脚水提液(FVSE)在七彩鲑(Salvelinus fontinalis)幼鱼体内的抗氧化作用及对生长、免疫及肠道菌群的影响。试验选取270尾七彩鲑幼鱼(平均体重为13.34±0.08 g),随机分为3组(CK:对照组;FVS:2%金针菇菇脚粉添加组;FVSE:2%金针菇菇脚提取液添加组),每组3个重复,每个重复30尾,试验期81天。试验结果如下:1.分级的乙醇浓度对金针菇菇脚多糖抗氧化活性产生影响,在试验研究范围内,低浓度乙醇沉淀物,抗氧化活性弱,随着乙醇浓度的升高,沉淀物多糖抗氧化活性逐渐增强,终浓度为75%沉淀获得的多糖在1.0mg/mL时抗氧化活性最强;纯化程度也可影响金针菇菇脚多糖抗氧化活性,在试验研究范围内,纯化程度低,抗氧化活性强。2.FVS组和FVSE组显著提高七彩鲑幼鱼肝胰脏总抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活性(P﹤0.05);FVSE组七彩鲑幼鱼过氧化氢酶(CAT)活力显著高于FVS组(P﹤0.05)。FVS组和FVSE组七彩鲑幼鱼的终末体重(FBW)、增重(WG)、特定生长率(SGR)及成活率(SR)显著高于对照组(P﹤0.05);FVS组和FVSE组七彩鲑幼鱼的饲料转化率(FCR)显著低于对照组(P﹤0.05);FVSE组七彩鲑幼鱼的肝体指数(HIS)显著高于对照组(P﹤0.05)。金针菇菇脚的添加对七彩鲑幼鱼全鱼的水分、粗蛋白、粗脂肪和粗灰分含量的影响均不显著(P﹥0.05)。3.FVS组血清中总蛋白含量(TP)和谷草转氨酶(AST)活性显著高于对照组(P﹤0.05),谷丙转氨酶(ALT)活性显著低于对照组(P﹤0.05)。FVSE组血清中总蛋白(TP)含量极显著提高(P﹤0.01);白蛋白(ALB)、球蛋白(GLO)、葡萄糖(GLU)、总胆固醇(CHOL)含量和谷草转氨酶(AST)活性显著提高(P﹤0.05),谷丙转氨酶(ALT)的活性显著降低(P﹤0.05)。FVSE组血清中总蛋白(TP)含量显著高于FVS组(P﹤0.05)。FVS组七彩鲑幼鱼肝胰脏中碱性磷酸酶(AKP)和酸性磷酸酶(ACP)活性显著升高(P﹤0.05);FVSE组溶菌酶(LYZ)、碱性磷酸酶(AKP)活性显著提高(P﹤0.05);酸性磷酸酶(ACP)活性极显著升高(P﹤0.01)。FVSE组七彩鲑幼鱼肝胰脏中酸性磷酸酶(ACP)活性显著高于FVS组(P﹤0.05)。FVS组和FVSE组均使七彩鲑幼鱼肝胰脏中HSP70、HSP90基因mRNA表达量显著降低(P﹤0.05)。4.七彩鲑幼鱼的核心菌群主要包括变形菌门(Proteobacteria)、放线菌门(Actinobacteria)和厚壁菌门(Firmicutes),其中变形菌门(Proteobacteria)丰度最高。金针菇菇脚的添加可提高七彩鲑幼鱼肠道菌群的多样性和丰度,FVS组菌群的多样性和丰度均显著提高(P﹤0.05),FVSE组丰度显著提高(P﹤0.05)。FVS组变形菌门(Proteobacteria)显著减少(P﹤0.05),放线菌门(Actinobacteria)、蓝藻门(Cyanobacteria)、绿弯菌门(Chloroflexi)、疣微菌门(Verrucomicrobia)、Saccharibacteria、衣原体门(Chlamydiae)显著增加(P﹤0.05);FVSE组衣原体门(Chlamydiae)显著增加(P﹤0.05)。综上所述,金针菇菇脚多糖的体外抗氧化活性与分级时乙醇浓度和纯化程度均相关,分级时乙醇浓度高、纯化程度低,其抗氧化活性强。金针菇菇脚中多糖等成分也可在七彩鲑幼鱼体内发挥抗氧化作用,提升抗氧化状态,提高生长性能和免疫能力,调节肠道菌群组成。