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目的白血病细胞耐药性的产生往往不是由一种耐药蛋白引起,而是由多种耐药蛋白共同表达起作用的结果,因此联合检测多种耐药蛋白的表达对于白血病患者的耐药性和预后评定具有更高的判断价值。蛋白质芯片技术利用编码的微量探针,实现对样品中蛋白质的准确、快速和大信息量的检测和分析,为高通量并行快速分析和检测蛋白质提供了强有力的工具。本研究应用低密度蛋白质芯片技术,首先成功制备检测白血病耐药相关蛋白的低密度蛋白质芯片,然后对白血病细胞株及临床白血病患者骨髓单个核细胞细胞裂解物多种耐药相关蛋白的表达进行了检测,以研究蛋白质芯片技术在检测白血病耐药相关蛋白方面的临床应用价值,为研究和制备用于临床预测急性白血病患者预后和指导个体化治疗的低密度蛋白质芯片奠定基础。方法1、蛋白质芯片的制备:选择与白血病细胞耐药密切相关的11种蛋白为检测指标,包括:P-糖蛋白(P-gp)、肺耐药蛋白/主要穹窿蛋白(LRP/MVP)、BCL-2、拓扑异构酶ⅡA(TopoⅡA)、拓扑异构酶ⅡB(TopoⅡB)、谷胱甘肽-硫-转移酶-π(GST-π)、血管内皮细胞生长因子(VEGF)、趋化因子受体CXCR4、增殖细胞核抗原(PCNA)、黏附分子淋巴细胞功能相关抗原-1(LFA-1)、肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体-受体(TRAIL-R),以抗原-抗体结合的模式,制备低密度蛋白质芯片。2、蛋白质芯片检测白血病细胞株耐药相关蛋白的表达:应用制备的蛋白质芯片对人髓系白血病细胞株HL-60、K562、耐药细胞株HL-60/VCR、K562/ADM,淋巴系耐药细胞株Jurkat、Burkitt淋巴瘤Raji细胞株进行检测。3、蛋白质芯片检测白血病患者骨髓单个核细胞耐药相关蛋白的表达:应用制备的蛋白质芯片对48例急性白血病患者及15例对照组的骨髓单个核细胞细胞裂解物进行检测。结果1、成功制备了检测白血病耐药相关蛋白的低密度蛋白质芯片。2、髓系白血病耐药细胞株P-gp、LRP/MVP、GST-π、VEGF表达高于非耐药细胞株,淋巴系白血病细胞株P-gp及CXCR4均有高表达。3、48例急性白血病患者分为难治性AML组、AML持续缓解组、难治性ALL组、ALL持续缓解组,难治性AML组P-gp、LRP/MVP、GST-π、PCNA蛋白表达量均明显高于对照组(P<0.05);难治性ALL组P-gp、LRP/MVP、GST-π、PCNA、LFA-1、CXCR4蛋白的表达量也均高于对照组(P<0.05);AML-CR组、ALL-CR组PCNA表达均高于对照组(P<0.05);难治性AML组P-gp、GST-π蛋白表达量高于AML持续缓解组(P<0.05),而难治性ALL组P-gp、LRP/MVP、GST-π、LFA-1、CXCR4蛋白的表达量高于ALL持续缓解组(P<0.05)。与难治性AML组相比,难治性ALL组LFA-1、CXCR4蛋白表达量升高(P<0.05)。我们根据对照组检测结果确定Cutoff值,以2项指标升高作为判定患者耐药的标准,准确性为81%,而3项以上指标升高者全部为难治复发病例(100%)。结论应用蛋白质芯片同时检测多种耐药相关蛋白的表达,具有操作简单、省时、所需样本量少等优点,一次反应可得到许多数据,联合检测多种耐药相关蛋白有助于更好的研究白血病的耐药机制、预测临床急性白血病的预后及指导临床个体化治疗。