论文部分内容阅读
目的: 以人runt相关转录因子3(human runt-related transcription factor3,RUNX3)的表达特点为参照,通过免疫组化,Western等试验方法,检测小凹蛋白-1(Caveolin-1)在胃癌癌变过程中不同时期的胃组织上的表达,结合其他实验小组前期实验数据,分析Caveolin-1于胃癌的不同发展时期的表达特点,为进一步深入研究Caveolin-1在胃癌的发生及发展过程中的具体作用及其对细胞凋亡机制所起到的影响提供理论依据。 方法: 实验所需胃癌石蜡和冰冻组织标本选自泰安市中心医院癌组织库,采集的胃癌组织与癌旁组织粘膜和正常胃粘膜作为对照。将术后提取的标本,经冰冻、分割、定位筛选处理,然后使用阵列制作设备,在所选取组织的阵列载体上,按照固定间隔盒顺序制成组织冰冻微阵列。分别采用免疫组织化学和Western蛋白印迹分析两种方法,在相同的实验设备、同当量试剂和实验过程下分别对84例冰冻标本中RUNX3和Caveolin-1的表达情况进行检测,其中胃癌28例、正常癌组织28例、癌旁组织28例。免疫组化实验后镜下取像,图像密度通过NIH Image software进行测量并用于统计分析;通过荧光自显影感光技术将Westem蛋白印迹印刻在Kodak XAY胶卷上,应用NIH gelanalysis software测出条带密集度并用于统计分析。所有结果通过平均值±SEM表示。这些结果通过one-way ANOVA进行分析。P<0.05在统计学上被认为有显著性差异。 结果: 1、RUNX3和caveolin-1在正常胃组织、胃癌旁组织及胃癌组织中的表达与分布采用免疫组织化学染色法,在同等实验条件下,对各组织中RUNX3和caveolin-1的表达和分布加以分析。低倍镜(10X)下观察,RUNX3在胃癌组织中呈弱着色,远远低于其在正常胃组织和胃癌旁组织上的着色。Caveolin-1的着色与RUNX3基本一致。显微镜下观察并进行统计分析发现,RUNX3在正常胃组织中(84.74%)、癌旁组织中(83.66%)和癌组织中(17.13%)的表达差异有明显的统计学意义(P<0.05)。Caveolin-1在正常胃组织中(87.54%)、癌旁组织中(84.3%)和癌组织中(12.5%)的表达与RUNX3的表达基本一致。 2、Western蛋白印记检测 为了验证免疫组化染色的结果,我们进行了RUNX3和caveolin-1在各组织中的Western蛋白印迹分析。正常胃组织与癌旁组织中可以检测出较强的RUNX3和caveolin-1的标记信号,而胃癌组织中仅有微弱的信号。通过统计学分析,RUNX3和caveolin-1在胃癌组织中的表达明显低于正常癌组织和癌旁组织(*P<0.05)。这些结果说明caveolin-1在各种胃组织中的表达与RUNX3的表达基本一致。 结论: 1、Caveolin-1在胃不同组织中的表达符合肿瘤抑制因子的特点,因此,提示Caveolin-1在胃组织癌变中起到肿瘤抑制效果。 2、RUNX3在胃癌组织中表达偏低,提示其为肿瘤抑制因子特点,与现今主流观点一致。 3、根据RUNX3在TGF-β传导路中所起的作用,结合实验结果,提示RUNX3通过调节TGF-β通路的相关因子的激酶激活途径,起到引导细胞凋亡的功能。 4、由于Caveolin-1和RUNX3都与TGF-β信号传导通路相关,提示Caveolin-1可能与RUNX3一样,参与到TGF-β信号传导通路的信号传导中,起调节作用。 5、在胃癌的发生和发展过程中,Caveolin-1做为抑癌基因的具体调节机制尚不明确,结合本研究前期其他实验小组研究结果和实验数据,提示Caveolin-1可能对于细胞贴壁生长有抑制作用,在某些方面可能参与到诱导细胞凋亡的途径当中。