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植物物种间的侧生器官大小差异可能非常显著,而某一特定植物物种的侧生器官大小却基本一致,表明器官大小是受到遗传因子严格调控的。与多细胞动物类似,高等植物的器官大小由协调的细胞增殖和细胞延展决定。前人研究已发现了多个器官大小的正、负调控子,它们分别在细胞增殖与细胞延展中起作用。环境因素、植物激素等也通过作用于这些调控蛋白,参与决定器官的最终大小。本文的研究发现拟南芥中一个编码丝/苏氨酸蛋白激酶的新基因Rhino可能在植物器官大小的调控方面发挥作用。文中共获得四个T-DNA插入的纯合株系,在rhino-1和rhino-2突变体中,T-DNA均位于其N-端的蛋白激酶域之后,C-端的螺旋-螺旋结构域之前,打断了自抑制域。在rhino-3中T-DNA的插入并未影响Rhino基因的功能,可以检测到完整的转录本,然而rhino-4是完全敲除的突变体,Rhino的激酶域也被打断了。rhino-1,rhino-2,rhino-4的地上部分器官以及主根都小于(短于)野生型,而rhino-3在表型上与野生型几乎没有区别。
本文主要对rhino-1进行了具体分析。rhino-1主根和花瓣面积的变短/变小是由于细胞数量的显著减少,而叶面积的减少则是由于细胞体积的变小。对第一对真叶生长的动态分析表明Rhino的突变并没有影响叶片的发育时机而是影响了细胞周期过程。对黄化苗下胚轴这一细胞延展与细胞分裂的模型器官进行荧光实时定量PCR分析,发现rhino-1中细胞周期基因的表达都高于野生型。在rhino-1根尖,表达细胞分裂指示基因CYCB1;1:GUS的细胞数少于野生型,而在叶片中却多于野生型。在pRHINO:GUS转基因拟南芥中,在根、叶和花中都能检测到GUS活性,而在根尖和茎顶端分生组织中却没有检测到,说明Rhino可能主要控制植物侧生器官的大小。Rhino定位于质膜上,而单独的Rhino激酶域可能为内质网定位。同时,rhino-1突变体存在向重性的缺陷,根表皮和皮层细胞中PIN2:GFP去极性定位,与此相一致的是,在根尖DR5rev:GFP信号的明显侧移。此外,rhino-1的维管发育存在缺陷,这可能是由于Sterol含量的减少造成的。综上所述,Rhino介导的细胞学过程对于植物生长发育中细胞周期的调控以及向重性是必需的。