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目的:观察南美洲响尾蛇神经毒素(Crotoxin)对体外培养的人食管癌Eca-109细胞株生长的抑制作用,体内局部用药对荷瘤裸鼠人食管癌Eca-109细胞移植瘤的抑制作用,探讨南美洲响尾蛇神经毒素(Crotoxin)的抗肿瘤作用及其可能的机制。方法:以人食管癌Eca-109细胞为实验对象,体外培养人食管癌Eca-109细胞株,分别以不同浓度的Crotoxin及顺铂作用于Eca-109细胞,并设阴性对照组,通过四氮唑盐还原法(MTT)观察Crotoxin对Eca-109细胞的生长抑制作用;倒置相差显微镜观察细胞的形态学改变,Hoechst33342染色后荧光显微镜观察细胞形态及细胞核的变化,应用流式细胞术检测Crotoxin对Eca-109细胞凋亡及细胞周期的影响;实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)测定Crotoxin作用后Eca-109细胞内BCL-2、P15及Caspase3-P17基因扩增水平。裸小鼠肩背部皮下注射人食管癌Eca-109细胞悬液,建立皮下移植瘤动物模型,分对照组和Crotoxin组(Crotoxin组为以生理盐水稀释至浓度为25-100μg/kg的Crotoxin注射液,对照组为相同剂量的生理盐水),均为瘤周皮下注射,隔日1次,共给药10次,停药后次日杀死所有动物,比较移植瘤瘤重,计算抑瘤率;蛋白免疫印迹法(Western blot)测定移植瘤内BCL-2、P15及Caspase3-P17蛋白表达水平。结果:Crotoxin对人食管癌Eca-109细胞生长有抑制作用,与顺铂比较,有相似甚至更强的抑制肿瘤细胞效果(P<0.05),Crotoxin对人食管癌Eca-109细胞有诱导凋亡的作用,倒置相差显微镜和荧光显微镜下均能观察到凋亡细胞的核固缩、染色质边集、核碎裂、凋亡小体形成等形态学特征。Crotoxin可引起Eca-109细胞内P15、Caspase3-P17基因扩增增加,BCL-2基因扩增减少,流式细胞仪可检测到Eca-109细胞的凋亡峰,Crotoxin药物浓度越大,检测到凋亡峰的时间越早,并有G1期细胞增多。Crotoxin对人食管癌Eca-109细胞裸小鼠移植瘤生长有抑制作用,抑瘤率为35.7%(Crotoxin 50ug/ml组);Western blot检测到Crotoxin作用后瘤体标本P15、Caspase3-P17蛋白表达升高,BCL-2蛋白表达降低结论:南美洲响尾蛇神经毒素(Crotoxin)对人食管癌Eca-109细胞体外生长有抑制作用,其作用与诱导凋亡和G1期阻滞有关,其中诱导凋亡作用可能和活化Caspase3有关。Crotoxin局部用药能抑制裸小鼠皮下人食管癌Eca-109细胞移植瘤的生长,且抑制作用与用药剂量相关。