农杆菌介导AtNHX2基因转化烟草及其对转化植株抗盐性的影响

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AtNHX2基因是拟南芥(Arabidopsisthaliana)体内编码液泡膜Na+/H+反向运载蛋白的基因之一,并有可能是植物抗盐的一个决定性因子。为了获得该基因的转基因植物,从而验证它与植物抗盐性相关的生物学功能,本文以含有AtNHX2cDNA的质粒pBANHX2作为植物表达载体,采用叶盘共培养法,通过农杆菌EHA105介导该基因对烟草(Nicotianatabacum)进行转化,并在含有Basta的培养基上筛选获得40株拟转基因植株。对其中10株拟转基因植株的基因组DNA进行AtNHX2基因的PCR检测分析,结果显示全部含有AtNHX2cDNA。对其中5个株系中呈Basta抗性的T1代植株的基因组DNA进行AtNHX2基因的PCR检测分析,结果显示全部也含有AtNHX2cDNA。   在此基础上实验观察了NaCl浓度梯度对上述5个转基因株系T1代离体再生芽生长的影响,结果显示转基因株系的抗盐性明显高于对照。转基因株系的离体再生芽可以在150mM和200mMNaCl浓度下存活2周以上,并可以较好地生长,而对照在150mM和200mMNaCl浓度下培养2周后全部死亡。实验结果在一定程度上证实了AtNHX2基因与植物抗盐性有关的生物学功能。
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