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脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)是革兰氏阴性细菌感染的主要致病因子，与某些炎症的发生密切相关。一般认为，脂多糖(LPS)经过脂多糖结合蛋白(LBP)、脂多糖受体CD14及Toll样受体将感染信号传递到细胞内，然后由胞内各相关信号传导路径介导引发机体的一系列反应。
LPS信号传导途径非常复杂，尽管近10年来对LPS介导的信号转导过程的认识有了很大的发展，但仍有许多关键的问题还不明白。很多过程仍是根据目前的研究结果所做的推测。因此探索新的内毒素应答分子，并研究新发现的LPS相关分子的功能，将会帮助我们更加深入地了解LPS的作用机制。
lrp(lipopolysaccharideresponsedgene)是LPS应答基因。系本课题组柴玉波博士采用基于PCR的改良消减杂交技术，构建LPS刺激后人牙髓细胞差异表达基因文库，从中筛选出的新基因，GenBank录入号为AF143740等。但当时得到的只是编码C-端186个氨基酸部分的cDNA序列.随后全长cDNA也相继被克隆并录入GenBank(录入号NM018360等).生物信息学分析表明，全长人lrp基因的开放读框为1584bp，编码528个氨基酸，编码序列中包含2个相互重叠的亮氨酸拉链结构和1个螺旋-转角-螺旋结构。
在未获得全长人lrp-cDNA序列的情况下，本组杜可军博士对基因编码C-端186个氨基酸的部分进行了组织分布情况、RNA干涉后对细胞影响等相关研究。但是由于一直没有克隆出全长lrp-cDNA编码区序列，对其功能研究始终存在局限性。
为此，本实验首先进行了全长lrp-cDNA编码区的克隆工作。采取RT-PCR的方法，从反转录获得的人胚肾细胞(HEK293)cDNA文库中扩增全长lrp-cDNA编码区序列。将其克隆入原核表达载体pcTAT，构建可表达融合蛋白6His-TAT-Lrp的重组质粒pcTAT-lrp，转化E.coliBL21(DE3)，IPTG诱导表达。测序结果表明RT-PCR获得了编码全长Lrp-cDNA的序列，SDS-PAGE分析结果表明，诱导后表达了分子量69kD的6His-TAT-Lrp融合蛋白。然后用所表达蛋白免疫新西兰大白兔制备兔抗人Lrp抗血清，并吸附去除非特异性反应成分。Western印迹结果表明，吸附后的抗体可以与Lrp蛋白特异结合，并有较高免疫印迹滴度。
在获得编码全长Lrp-cDNA的序列和兔抗人Lrp多克隆抗体的基础上，本实验接着进行了Lrp在细胞中的定位、LPS对细胞中lrp表达的影响以及Lrp对细胞周期影响三个方面的实验分析。
1.Lrp在细胞中的定位为了确定Lrp在细胞中的定位，构建了Lrp真核表达载体pcDNA3.1(+)-lrp，将其瞬时转染HEK293细胞，绿色荧光蛋白免疫组化染色后用激光共聚焦扫描荧光显微镜观察Lrp在细胞中的分布情况。检测结果表明Lrp在胞浆和核膜周围均有分布，在核膜部位的分布尤为突出。接着用PCR法扩增了lrp-cDNA编码区的定点及截短突变序列，并连入真核表达载体pcDNA3.1(+)，瞬时转染HEK293细胞，绿色荧光蛋白免疫组化染色后用激光共聚焦扫描荧光显微镜观察Lrp截短和定点突变后在细胞中定位的变化。结果显示，截短蛋白Lrp△N仍然保留了一定的正常Lrp蛋白定位趋向，而点突变蛋白Lrpm只能看出主要分布于胞浆，已无向核膜周围集中的表现。提示Lrp蛋白的定位信号区域可能位于C-端。
2.LPS对Lrp在细胞中表达的影响lrp是从LPS刺激后人牙髓细胞差异表达基因文库中筛选出的基因，为了确定LPS对细胞表达Lrp的水平到底有何影响，实验用加入了一定浓度LPS的细胞培养液培养HEK293和U937细胞，建立脂多糖刺激的细胞生长模型，然后以未刺激的正常生长细胞为对照，进行WesternBlot和DAB免疫组化染色分析。免疫印迹和免疫组化的分析结果都一致表明，经过LPS刺激后，HEK293和U937细胞中Lrp的表达水平均明显上升。说明Lrp可能与LPS介导的反应有关。
3.Lrp对细胞周期影响生物信息学分析表明，人lrp基因编码序列中包含2个相互重叠的亮氨酸拉链结构，而亮氨酸拉链结构是DNA结合蛋白的特征型结构；Lrp在细胞中的定位分析也表明，Lrp呈向核膜周围集中分布的特征。说明Lrp的功能很可能与胞核相关，那么会不会影响细胞周期呢?为了分析Lrp对细胞周期影响，实验将lrp-cDNA序列连入真核表达载体pIRES2-EGFP，构建可同时表达Lrp和绿色荧光蛋白的重组质粒pIRES2-EGFP-lrp，pIRES2-EGFP和pIRES2-EGFP-lrp均瞬时转染HEK293细胞，然后用流式细胞仪分别对LPS刺激与未刺激的转染空载体细胞和LPS刺激与未刺激的转染pIRES2-EGFP-lrp的细胞带绿色荧光的的群体作细胞周期检测。转染pIRES2-EGFP-lrp与转染空载体的HEK293细胞比较，转染pIRES2-EGFP-lrp的细胞LPS刺激与未刺激比较，以及转染空载体细胞LPS刺激与未刺激比较，结果显示细胞周期中各阶段的细胞数量比例并无明显的变化。说明高表达Lrp对细胞周期并无显著的影响。