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目的：分别制备出包含有重组人骨形态发生蛋白-2(Recombinant Human bone morphogenetic Protein,BMP-2)、血管内皮生长因子(Vascular Endothelial Growth Factor,VEGF)以及两种因子混合的壳聚糖(chitosan,CTS)纳米粒,并对纳米粒的体外释放效果进行评价,为进一步研究两种蛋白因子在生物学功能上的相互影响及联合应用效果等体内实验奠定基础。方法：1.以三聚磷酸钠(sodium tripolyphosphate,TPP)为交联剂,采用离子交联法,通过空白纳米粒筛选成形范围,分别制备出空白、包载rhBMP-2、rhVEGF、rhBMP-2-VEGF复合的壳聚糖纳米粒,对上述因子蛋白浓度、CTS浓度、TPP浓度、CTS与TPP质量比这几个因素进行正交工艺验证,然后通过透视电镜观察纳米粒形态及分布,粒径分析仪测定纳米粒粒径及Zate电位。2.利用酶联免疫吸附试验(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)测定载药壳聚糖纳米粒的包封率并描述其缓释药动学,计算各个时间点的累积释放率,绘制释放曲线。结果：1.离子交联法制备壳聚糖纳米粒操作简单、工艺稳定,制得的纳米粒规则呈球形、分散性好、粒径集中。2. rhVEGF壳聚糖纳米粒制备最优化工艺条件为：rhVEGF浓度为10ng/ml, CTS浓度为2mg/ml, TPP浓度为1.5mg/ml, CTS/TPP为5：1,此时所得rhVEGF壳聚糖纳米粒粒径为346.2±2.4nm, PDI为0.219±0.017,Zeta电位为24.0±0.9,包封率达98.43±1.10%。3. rhBMP-2壳聚糖纳米粒制备最优化的工艺条件为：rhBMP-2浓度为50ng/ml, CTS浓度为3mg/ml, TPP浓度为1mg/ml, CTS/TPP为5：1,此时所得rhBMP-2壳聚糖纳米粒粒径为333.0±2.3nm, PDI为0.463±0.013, Zeta电位为30.0±0.8,包封率达92.63±1.33%。4. rhBMP-2-rhVEGF壳聚糖纳米粒制备最优化的工艺条件为：rhBMP-2浓度为50ng/ml, rhVEGF浓度为10ng/ml, CTS浓度为1mg/ml, TPP浓度为1.5mg/ml, CTS/TPP为5：1,此时所得rhBMP-2-rhVEGF壳聚糖纳米粒粒径为396.0±1.8nm, PDI为0.403±0.005, Zeta电位为29.8±1.8,rhVEGF包封率为86.6±0.8%,rhBMP-2包封率为93.72±1.30%。5.三种载蛋白的壳聚糖纳米粒体外缓释曲线相近,释放最初24小时,释药量为1%-2%,后面快速上升,到第20天时,曲线趋于平缓,30天时,释药量达90%。结论：1.采用离子交联法制备壳聚糖纳米粒时,蛋白浓度、CTS浓度、TPP浓度、CTS与TPP质量比对纳米粒的粒径、Zeta电位、包封率等有明显影响。2.通过本实验制备出的rhBMP-2-rhVEGF壳聚糖纳米粒具有良好的体外缓释性能。