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八氯苯乙烯(OCS)是一种高氯代芳香族化合物,具有持久性和生物积累性两个特点,属于潜在的持久性有机污染物。在过去的十几年里已经建立的检测OCS方法主要有气相色谱、高效液相色谱、气相色谱-质谱法连用(GC-MS)和凝胶渗透色谱法(GPC)。虽然这些方法具有广泛的实用性、分析结果准确度高,但是因成本高、仪器贵重和对操作人员的专业要求高等缺点不能满足大批量样品现场快速分析的要求。因此,OCS的检测迫切需要一种新型的,简单的,灵敏的,费用低的检测方法。新型,快速,费用低,简单的OCS测定方法,为OCS的研究和控制提供了便利条件。Ercegovich等人于1971年第一次将免疫分析方法应用到环境监测,近年来,免疫分析技术在环境领域已得到了广泛的认可与应用,同时新的方法和新的手段的不断出现为环境持久性有机污染物的免疫分析方法的发展奠定了坚实的基础。免疫分析方法的特异性强、灵敏度高、操作方法简单、分析容量大、检测成本低、不需要昂贵仪器、前处理步骤简化等优点是常规仪器分析所不能比拟的,另外它所具备的选择性强和灵敏度高的特点使之非常适合于复杂基质中痕量组分的分析检测。目前,对环境持久性有机污染物免疫分析方法的研究,国内外均报道,主要侧重于ELISA法。据文献调研结果,目前没有关于OCS物质的免疫检测报道。本论文将八氯苯乙烯进行衍生化,合成半抗原,然后将他们分别与两种不同的蛋白质偶联合成免疫原和包被原。用人工抗原免疫大白兔,制备出具有高亲和力的抗八氯苯乙烯抗体,最后以抗八氯苯乙烯血清为基础建立检测八氯苯乙烯的间接竞争酶联免疫吸附测定法。具体研究内容如下:(1)八氯苯乙烯半抗原和人工抗原的合成及鉴定为了建立针对八氯苯乙烯的免疫分析方法,本文以五氯硝基苯为出发点,逐步合成了八氯苯乙烯半抗原,再用活化酯法将八氯苯乙烯半抗原分别与牛血清白蛋白偶联合成免疫原OCS-BSA,与卵白蛋白偶联合成包被原OCS-OVA。经过彻底透析后,通过紫外光谱鉴定得知人工抗原已成功合成。最后粗略计算免疫原OCS-BSA中半抗原与BSA的结合比为25:1,包被原OCS-OVA中半抗原与OVA的结合比为22:1。(2)八氯苯乙烯多克隆抗体的制备和效价的测定用免疫原OCS1-BSA、OCS2-BSA和OCS3-BSA分别免疫两只大白兔,制备抗血清,平行两只兔子取效价高的血清备用,最后得抗血清的最高效价分别为1:128000,1:256000和1:64000。(3)八氯苯乙烯间接竞争酶联免疫吸附测定法的建立通过对包被原、抗血清、缓冲溶液的pH值、Tween-20的含量和有机溶剂的种类及含量进行优化,得到了ic-ELISA检测方法的标准曲线、灵敏度和线性范围。结果显示最优条件为:以10μg/mL的OCS1-OVA作为包被原,用OCS2-BSA作为免疫原,获得的最佳抗血清稀释倍数为1:128000,稀释待测物的溶液为含有15%乙腈的pH7.4,0.05M PBS缓冲溶液并含有0.005%的Tween-20。在这些优化条件下建立的ic-ELISA法的线性范围为1.4-86.3ng/mL,IC50是4.46ng/mL,最低检测线(IC10)是0.1ng/mL,与十二种结构类似物的交叉反应率都较低,平均值小于5%,用此方法检测水样和血样的加标实验,其加标回收率平均值为91.6%。