硫酸头孢喹肟在肉鸡组织中的残留消除研究

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头孢查肟是动物专用的第四代抗生素,属于半合成抗生素。对内酰胺酶的稳定性高,抗菌谱广,血药浓度高,可透过血脑屏障。它对革兰氏阳性菌和革兰阴性菌均有效,但对于革兰氏阴性厌氧菌的作用有限,对肾脏低毒。临床上主要用于治疗猪、牛、马的呼吸道感染,以及奶牛乳房炎、乳房炎-子宫炎-无乳综合症等各种细菌性疾病,也有将其用于治疗鸭传染性浆膜炎,鸡、鹅的大肠杆菌、沙门氏菌、巴氏杆菌等病原菌以及支原体感染。目前国际国内尚未批准硫酸头孢喹肟在养禽业中使用,关于硫酸头孢喹肟在鸡可食性组织中残留的报道十分稀少。然而,我们却面临着硫酸头孢喹肟被越来越广泛的应用于禽类疾病治疗的现实。为了减少或避免可食性的动物组织及产品中残留的药物超量,本研究建立了硫酸头孢喹肟在鸡组织中的残留检测方法,并在此基础上研究了硫酸头孢查肟在肉鸡组织中的残留消除情况,为制定合理的休药期提供科学依据。本研究建立了测定鸡组织中硫酸头孢喹肟残留的高效液相色谱法(HPLC)。取肉鸡的皮脂、肌肉、肝脏、肾脏组织匀浆,按照体积比20:1的比例添加硫酸头孢查肟标准品,制成的生物样品经乙腈-水(1:11)提取后,正己烷去脂,经过固相萃取柱富集净化,收集的洗脱液在50℃水浴条件下N2吹干后复溶,在C18色谱柱上进行分离,紫外检测器(270 nm)下检测。以甲酸调节的乙腈-水溶液(体积比为1:10)作为流动相(pH 3.0)。该方法测得硫酸头孢查肟在皮脂、肌肉、肝脏、肾脏等组织中的检测限均为0.01 μg/g,定量限均为0.02μg/g;各个组织中硫酸头孢喹肟浓度在0.02 μg/g~2 μg/g范围内,线性关系良好,相关系数(R2)均大于0.99;添加高、中、低浓度的硫酸头孢喹肟后,其在皮脂、肌肉、肝脏、肾脏中的平均回收率分别为89.5%、88.9%、89.9%和85.9%;日内变异系数0.86%~11.8%,日间变异系数在2.44%~11.13%,均符合添加回收率和变异系数的规定;含有药物的生物样品48 h内在常温、4℃及-20℃条件下均不降解,稳定性好;在匀浆组织中添加与硫酸头孢喹肟结构及性质相近的几种药物,均不会干扰硫酸头孢喹肟的检测。结果证明,建立的检测鸡组织中硫酸头孢喹肟残留的HPLC法精确度高、准确性和重现性好,符合残留检测的要求。在已经建立检测方法的基础上,试验选取100只白羽肉鸡,采用肉鸡颈部皮下注射硫酸头孢查肟注射液,注射剂量为1 mg/kg·bw,每天一次,连续给药7天,分别在给药后0.25 d、0.5 d、1d、2d、3d、4 d、5 d、6 d、8 d的时间点各宰杀10只受试鸡并取皮脂、肌肉、肝脏、肾脏样品。按照上述前处理方法处理后,利用高效液相色谱仪进行分析。结果显示:受试鸡肝脏、肾脏中硫酸头孢喹肟的残留量较高,皮脂和肌肉中硫酸头孢喹肟的残留量较低,提示肝脏和肾脏是硫酸头孢喹肟在鸡体内残留的靶组织。参照硫酸头孢查肟在猪可食性组织内的最大残留限量规定,休药6h时,皮脂和肌肉中的硫酸头孢喹肟的残留量均低于最大残留限量;休药12 h时,肝脏和肾脏中硫酸头孢查肟的残留量均低于最高残留限量;休药5 d后,受试鸡各组织中硫酸头孢查肟的残留量均低于最低检测限。根据休药期WT14软件,按照双单侧95%置信区间计算所得,硫酸头孢查肟在鸡肝脏中的休药期为2.53 d,在肾脏中的休药期为0.73 d,在皮脂中的休药期为0d,在肌肉中的休药期为0d,依据本研究结果,建议休药期为3d。
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