肠道病毒68型(Enterovirus 68,EV-D68)是小RNA病毒科(Picromaviradae),肠道病毒属D组的成员,于1962年首次被分离鉴定。自2005年以来在全球多个地发生EV-D68相关疾病的爆发和流行。儿童感染EVD68可引起咽炎和支气管炎等多种呼吸道疾病,严重时可导致肺炎和呼吸衰竭。EV-D68严重危害公众健康,目前仍然没有有效的疫苗可以用于EV-D68引起的相关疾病的防治。疫苗是控制和预防传染性疾病最有效的措施。病毒样颗粒(Virus-like particles,VLPs)是由病毒的一种结构蛋白或多种结构蛋白组成而不含有病毒基因组,它是一种新型的疫苗形式。VLPs经过自组装后形成的模拟天然病毒的结构,具有病毒类似的免疫原性而能有效激活机体的天然免疫和获得性免疫应答;但因其不含有病毒基因组,在体内不会复制增殖,VLPs比活疫苗相对更安全。自重组乙肝疫苗上市以来,VLPs引起人们的广泛关注,目前已成为疫苗研发领域的热点。昆虫杆状病毒表达系统是目前常用的表达、制备VLPs的系统。本论文基于昆虫杆状病毒表达系统(Bac-to-Bac)制备EV-D68-VLPs。通过对EV-D68-VLPs收获时间及感染复数(MOI)等参数的优化,确定MOI为0.2,感染后72 h收获EV-D68-VLPs表达量相对较高。应用Western Blotting和透射电镜(TEM)对由蔗糖密度梯度离心(30%、40%、50%)方法纯化制备的VLPs进行了鉴定,结果显示成功制备了EV-D68-VLPs。应用BALB/c小鼠模型,评价了EV-D68-VLPs的免疫原性。三针免疫策略,EV-D68-VLPs能诱导小鼠产生较高的抗EV-D68中和抗体。在提高免疫剂量后,中和抗体滴度随之提高,呈良好的剂量效应关系。此外,在相同剂量组,添加氢氧化铝佐剂有助于提高中和抗体效价。综上所述,本论文利用昆虫杆状表达系统成功制备了具有免疫原性的EV-D68-VLPs。这为以后EV-D68的疫苗研发提供了技术方法和依据。