【摘 要】
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研究CDl47siRNA转染对恶性黑素瘤细胞株A375中CDl47表达及细胞增殖的影响，及其对A375细胞在体内外浸润和转移能力的影响。旨在进一步明确CDl47在恶性黑素瘤进展过程中的作用及
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研究CDl47siRNA转染对恶性黑素瘤细胞株A375中CDl47表达及细胞增殖的影响，及其对A375细胞在体内外浸润和转移能力的影响。旨在进一步明确CDl47在恶性黑素瘤进展过程中的作用及机制，探讨将CDl47作为靶分子，运用siRNA技术对恶性黑素瘤进行基因治疗的可行性。
方法
1．将前期构建的重组质粒pSUPER/CDl47siRNA稳定转染至A375细胞中，采用半定量RT-PCR法检测转染细胞中CDl47mRNA的表达变化；
2．采用MTT法检测转染pSUPER/CDl47siRNA 24、48和72h后A375细胞增殖水平的变化；
3．采用Transwell法检测CDl47siRNA对A375细胞的体外侵袭能力的影响；
4．采用裸鼠皮下异种移植模型和肺转移模型观察CDl47siRNA对A375细胞在体内侵袭和转移能力的影响。
结果
1．转染pSUPER/CDl47siRNA后，A375细胞中CDl47mRNA的表达水平显著降低，二条针对CDl47不同位点的siRNA的干扰效果分别为90.81％(p<0.001)和13.37％(p<0.05)，并选择了抑制效果较好的细胞克隆，将其建立为稳定转染的恶性黑素瘤细胞株，用于开展下一步的研究；
2．CDl47siRNA使A375细胞在转染后24、48和72h的增殖水平均显著下降，其下降率分别为46.67％(p<0.05)，47.40％(P<0.01)和50.58％(p<0.01)：
3．CDl47siRNA转染显著下调了A375细胞的体外侵袭水平，下调率为50.75％(P<0.01)；
4．CDl47siRNA使裸鼠皮下肿瘤的大小降低了53.53％(p<0.01)，细胞肺转移的发生率亦由转染前的10/12降至0/12。
结论
1. CDl47与恶性黑素瘤的增殖、浸润和转移相关，可能是一种新的肿瘤治疗靶分子；
2．由siRNA介导的RNAi技术可能是一种有效的肿瘤基因治疗新方法。
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