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单克隆抗体(单抗)作为重要的生物技术药物,具有巨大的市场需求和开发潜力,传统的蛋白A亲和层析分离存在一些不足,因此开发经济高效的单抗分离新方法和新介质具有十分重要的意义。疏水性电荷诱导层析(HCIC)作为近年来发展迅速的抗体分离新方法,具有一定优势,但分离工艺和配基结构有待进一步优化。本论文选择两种典型的单抗药物,抗HER2单抗和抗IL-12.23单抗,探讨HCIC从CHO细胞培养上清液中分离单抗,考察吸附性能,优化分离条件,比较分析商业化介质和本课题组开发的新型HCIC介质,为单抗规模化分离纯化提供了新思路。首先,将典型的HCIC介质MEP HyperCel应用于CHO细胞培养上清液中抗HER2单抗的分离。考察了细胞培养液上清液的特性,发现温度和pH对单抗稳定性有一定影响。考察了MEP HyperCel介质对抗HER2单抗的吸附性能,发现中性pH时吸附容量较高,酸性pH时吸附容量显著下降。考察了抗HER2单抗的动态载量,优化了分离工艺,确定了合适的上样和洗脱条件,实现了细胞培养液中抗HER2单抗的高效分离,纯度达到94.6%,得率约0.1mg/(ml料液)。其次,采用本课题组设计和制备的HCIC介质ABI,以氨基苯并咪唑为功能配基,从CHO细胞培养上清液中分离抗白介素12.23单抗(抗IL-12.23单抗),并与MEP HyperCel介质比较。结果表明,ABI介质对单抗的吸附性能良好,静态吸附容量略低于MEP HyperCel介质,但动态载量较高,受流速影响小,适合于高流速操作。优化了单抗分离工艺,包括上样和洗脱过程,确定了合适的分离条件,实现了细胞培养液中高效分离单抗,pH3.6条件下洗脱单抗纯度达到98.6%,收率为93.0%,明显优于MEP HyperCel介质。最后,采用本课题组设计、具有双功能配基色氨酸-氨基苯并咪唑的新型HCIC介质W-ABI,从CHO细胞培养上清液中分离抗IL-12.23单抗。结果表明,pn对W-ABI介质吸附单抗影响显著,中性pH范围内吸附容量较高,酸性pH条件下可以通过静电排斥作用实现解吸。W-ABI介质的动态载量受流速影响较小,高流速条件下仍保持较高的载量,性能优于MEP HyperCel介质。优化洗脱pH后,单抗纯度达97.2%,收率达93.3%,收率高于蛋白A亲和层析,洗脱组分中宿主细胞残留量(HCP)明显低于MEP HyperCel分离,显示出良好的应用前景。本论文围绕哺乳动物细胞培养液中高效分离单抗,从提高HCIC分离抗体的效率出发,对分离工艺进行了优化,探讨了两种新型HCIC介质的分离性能,分析了不同介质的分离效果,显示了新介质的应用潜力,证实了HCIC分离单抗的可行性,为单抗分离新方法和新介质的进一步开发和应用打下了基础。