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州河鲤分布于天津市蓟县境内的于桥水库,是天津市地方野鲤。州河鲤有很多不同于其他鲤鱼之处,如体形似草鱼,体高与体长比小(体高较小)、肉质较好。本试验以州河里为主要试验材料,并以在我国广泛养殖的建鲤和框鳞镜鲤作为对照,进行相关研究。以期为州河鲤种质资源的开发与利用提供依据。
本研究应用线粒体DNA的RFLP技术和同工酶技术对州河鲤、建鲤以及框鳞镜鲤的遗传结构进行检测。并对州河鲤进行基本生物学性状的测量、染色体的制备与计数以及血细胞大小的测量。
1.应用PCR技术扩增州河鲤(36尾)、建鲤(32尾)以及框鳞镜鲤(38尾)的mtDNA的D-loop区段,得到约1.6kb长度的扩增片段。扩增出的DNA片段使用13种核酸内切限制酶进行酶切,其中8种核酸内切限制酶(AluI、Dra I、EcoR I、HaeⅢ、HapⅡ、HinfⅠ、TaqⅠ和XspⅠ)有酶切位点,4种核酸内切限制酶(DraⅠ、HaeⅢ、TaqⅠ和XspⅠ)个体间存在变异。不同酶切结果组合后,共得到6种单倍型。州河鲤中以单倍型Ⅲ为主,达91.37%,建鲤以单倍型Ⅵ为主,达81.25%;框鳞镜鲤中单倍型Ⅱ占39.47%,单倍型Ⅲ占47.37%;州河鲤与框鳞镜鲤间的Rogers遗传距最小,为0.4080;州河鲤与建鲤间的为0.8440;框鳞镜鲤与建鲤间的为0.6469,此结果表明建鲤与州河鲤、框鳞镜鲤间的遗传差异较大。
2.使用水平式淀粉凝胶电泳法,对采自天津地区的州河鲤、建鲤和框鳞镜鲤三个群体进行了AAT、α-GPD、 GPI、IDH、MDH和PGM共6种同工酶以及肌浆蛋白(PROT)的电泳分析。检测出12个基因座位,在州河鲤中存在变异的是α-GPD*、GPI*、MDH-2*、PGM*、PROT*,在建鲤群体中存在变异的是α-GPD*、GPI*和PGM*,在框鳞镜鲤群体中存在变异是α-GPD*、GPI*、PGM*和PROT*。州河鲤、建鲤、框鳞镜鲤的多态基因座位比例( P0.99)分别为41.67%、25.00%和33.33%,平均杂合度预期值(He)分别为0.0449、0.0749、0.0518; PGM*可以作为区分三个群体的标记基因座位,在州河鲤群体中*c/c基因型占85.71%,在建鲤群体中*b/c基因型占65.71%,在框鳞镜鲤群体中*b/b基因型占56.67%。
3.用PCR的方法扩增州河鲤、建鲤和框鳞镜鲤的线粒体DNA的Cytb的部分区段,都扩增出400 bp的条带,没有琵琶湖野鲤特有的280 bp片段出现,表明州河鲤和建鲤、框鳞镜鲤同属于欧亚鲤鱼群体。州河鲤从地理分布和其生物学性状的测量结果上看,应属于鲤亚种,但州河鲤的体长/体高值却远高于鲤亚种的其它类型。
4.采用PHA体内培养法,取肾细胞用空气干燥法制备州河鲤的染色体标本,对染色体进行计数并对其红细胞大小进行测量。结果得到州河鲤染色体数目为100,红细胞长径和细胞短径分别为12.69±0.85μm和8.95±0.58μm。