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目的乳腺癌是危害我国妇女健康最主要的恶性肿瘤之一。主要治疗方法包括手术、化疗、放疗、内分泌治疗等,但各有局限性,特别是放、化疗对正常细胞具有毒性作用。因此,寻找一种有效杀伤乳腺癌细胞而毒副作用小的新方法是当前亟待解决的课题。肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TNF-related apoptosis-inducing ligand, TRAIL)是与细胞死亡密切相关的肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)超家族成员,能与死亡受体(death receptor, DR) DR4和DR5结合,特异性诱导肿瘤细胞凋亡,对正常细胞的毒性作用却很小,因而成为应用前景广泛的抗肿瘤制剂。白藜芦醇是一种多酚类天然化合物,葡萄皮和红酒中含量尤为丰富,不但具有调节脂质代谢、抑制血小板聚集、保护心血管、抗炎、抗氧化等多种生物学活性和药理作用,而且具有显著的抑制肿瘤的作用。本研究将TRAIL与白藜芦醇联合,观察对人乳腺癌细胞系MDA-MB-231增殖及凋亡的影响及机制,为探索治疗乳腺癌的新方法提供依据。方法分别将不同浓度的TRAIL及白藜芦醇单独或联合作用于体外细胞培养技术培养的人乳腺癌细胞系MDA-MB-231。应用MTT法及软琼脂集落形成实验检测药物对肿瘤细胞增殖的抑制。DAPI染色法检测细胞凋亡的形态学改变。流式细胞术检测细胞凋亡率。流式细胞术检测细胞表面TRAIL受体DR4和DR5蛋白表达的变化。结果1、TRAIL联合白藜芦醇协同抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞的生长：25、50、100、200μmol／L白藜芦醇作用12h,对MDA-MB-231细胞增殖的抑制率分别为24.22%±1.66%、30.79%±1.60%、45.72%±1.25%和53.31%±1.94%；50、100、200ng/ml TRAIL作用12h,细胞增殖抑制率为13.69%±3.24%、45.99%±1.37%和61.29%±3.41%；与对照组比较,均有统计学差异(P<0.01)。50ng／ml TRAIL分别与50、100μmol／L白藜芦醇联合应用后,增殖抑制率分别增至62.43%±2.07%和87.32%±1.44%,与单独应用相应浓度的TRAIL及白藜芦醇比较,差异显著(P<0.01)。联合组中,100μmol／L白藜芦醇组与较50μmol／L白藜芦醇组差异显著(P<0.01)。软琼脂集落形成实验中,对照组集落形成率为7.17%±0.49%；50ng／ml TRAIL组集落形成率为5.95%±0.05%；50、100μmol／L白藜芦醇组集落形成率为4.55%±0.08%和3.75%±0.09%；与对照组比较,均有统计学差异(P<0.01)。50ng／mlTRAIL与50、100μmol／L白藜芦醇联合应用,集落形成率分别为2.49%±0.08%和1.38%±0.07%,与单独应用相应浓度的TRAIL和白藜芦醇比较,差异显著(P<0.01)。联合组中,100μmol／L白藜芦醇组较50μmol／L白藜芦醇组差异显著(P<0.01)。2、TRAIL联合白藜芦醇协同诱导人乳腺癌MDA-MB-231细胞的凋亡：经DAPI染色,对照组细胞胞核完整,呈椭圆形,胞核内染色质均匀分布；TRAIL和白藜芦醇单独处理后,部分胞核染色质凝聚、边集；TRAIL与白藜芦醇联合作用后,多数胞核皱缩,染色质凝聚、边集,荧光强度明显增加,并出现胞核碎裂等晚期凋亡的典型形态学改变。50、100、200μmol／L白藜芦醇处理后细胞凋亡率分别为28.80%±1.34%、38.78%±1.19%和58.96%±1.26%；50、100、200ng／ml TRAIL处理后,细胞凋亡率分别为15.94%±0.34%、42.62%±0.99%和76.30%±2.80%；与对照组(凋亡率为3.53%±0.25%)比较,均有统计学差异(P<0.01)。50ng／mlTRAIL与50、100μmol／L白藜芦醇联合应用后,凋亡率分别增加至53.59%±1.44%和73.72%±1.96%,与单独应用相应浓度的TRAIL及白藜芦醇比较,差异显著(P<0.01)。联合组中,100μmol／L白藜芦醇组较50μmol／L白藜芦醇组差异显著(P<0.01)。3、白藜芦醇上调DR4、DR5在细胞膜表面的表达：对照组细胞表面表达DR4、DR5,荧光指数(FI)分别1.52±0.04和1.61±0.13。50、100、200μmol／L白藜芦醇作用后,DR4的FI值分别为1.80±0.07、2.11±0.14和2.59±0.16,与对照组比较差异显著(P<0.01),组间比较差异显著(P<0.01)；DR5的FI值分别为2.16±0.08、2.92±0.25和3.90±0.06,与对照组比较差异显著(P<0.01),组间比较差异显著(P<0.01)。而50、100、200ng／ml TRAIL组DR4及DR5的FI值较相应的对照组均没有差异(P>0.05)。结论1、TRAIL和白藜芦醇单独作用,对MDA-MB-231细胞均有抑制增殖及诱导凋亡的作用,并呈浓度依赖关系。2、TRAIL联合白藜芦醇协同抑制MDA-MB-231细胞的增殖及诱导其凋亡,并呈浓度依赖关系。3、白藜芦醇上调TRAIL死亡受体DR4、DR5蛋白在乳腺癌细胞表面的表达可能是两者协同效应的分子机制之一