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组织特异表达的启动子是转基因载体结构中的重要调控元件。本研究克隆了水牛、黄牛CYP19启动子0.9k和1.6k各两个片段，大鼠卵巢特异性启动子(OSP-1)片段，并构建了真核表达载体在细胞水平进行了检测。参考GenBank发布的黄牛CYP19基因exon2序列和大鼠OSP-1序列，设计了3对特异性引物，以黄牛、水牛和大鼠基因组为模板，PCR扩增获得5个相应长度的启动子片段，经克隆、测序和序列比对发现，水牛和黄牛相应片段与已知序列的相似性分别为95％、99％，大鼠的为96％，初步证明获得的片段为预期设计的启动子区。双酶切将5个启动子片段定向克隆到去除CMV的pEGFP-N1载体，构建成5个真核表达载体pHCYP19-0.9-EGFP-N1、pSCYP19-0.9-EGFP-N1、pHCYP19-1.6-EGFP-N1、pSCYP19-1.6-EGFP-N1和pOSP-1-EGFP-N1.
应用脂质体LipofectamineTM2000介导将载体分别转染水牛的颗粒细胞、乳腺上皮细胞和胎儿成纤维细胞，并于转染后12h，24h和48h在荧光显微镜下观察EGFP表达情况。结果显示：转染pOSP-1-EGFP-N1的水牛颗粒细胞，12h后可观测到EGFP的表达，24h后表达EGFP的细胞增多，48h后EGFP表达的细胞数量骤减。转染pHCYP19-0.9-EGFP-N1和pSCYP19-0.9-EGFP-N1的颗粒细胞，仅在转染后24h观测到少量表达EGFP的细胞，且荧光较弱，48h后基本观察不到EGFP表达的细胞；转染pHCYP19-1.6-EGFP-N1和pSCYP19-1.6-EGFP-N1载体后没有观察到EGFP表达的细胞，5种载体转染乳腺上皮细胞和胎儿成纤维细胞，均未观察到EGFP表达的细胞。结论：(1)应用PCR扩增获得了黄牛CYP19启动子(935 bp，1571bp)，水牛CYP19启动子(945bp，1586bp)和大鼠OSP-1启动子(480bp)片段；(2)其中黄牛、水牛的CYP19启动子(0.9k)和大鼠OSP-1启动子均可启动EGFP在卵巢颗粒细胞中特异表达，且OSP-1的启动效率远远高于CYP19启动子，可作为卵巢组织特异性表达载体构建的调控元件。