OGP转染对BMSC的促成骨作用及CTOGP的生物合成和活性研究

来源 :哈尔滨医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:hzau1
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成骨生长肽(OGP)为14肽,具有促进成骨和造血等多种功能。目前的研究均以合成OGP肽为手段,研究其活性。本研究将人工合成的OGP基因重组到真核表达质粒pcDNA3.1中,使之位于高效启动子CMV下游。将构建成功的pcDNA3.1-OGP重组质粒用脂质体介导转染兔骨髓基质干细胞并成功表达。进而通过半定量RT-PCR证实,转染后Ⅰ型胶原的基因转录增加,并伴有碱性磷酸酶活性增强,提示转染OGP基因促进了受体细胞向成骨方向分化。这一构想的实施,为临床治疗骨不连、股骨头坏死等骨科病提供了新的策略,具有重要的理论和实践意义。 骨质疏松症(OP)是世界范围内的多发病,目前临床上对OP的治疗药物(降钙素等)尚以抑制破骨为主;另外,目前也有将成骨生长肽用于骨质疏松症治疗的研究报道。本研究考虑在抑制破骨和骨吸收的同时,兼顾骨重建将更有利于骨质疏松的治疗,将降钙素(CT)和成骨生长肽(OGP)串联(CT在N端,OGP在C端),并且引入RGD序列,中间用几个Gly柔性相连,成功构建了pTYB2-CTOGP表达质粒。利用E.coli系统表达,IMPACT-CN系统纯化得到目的肽CTOGP。细胞实验表明,CTOGP能够促进骨髓间充质干细胞(BMSC)增殖,促增殖的浓度为10<-12>mol/L;同时在此浓度下促进BMSC内Ⅰ型胶原表达上调。体内实验表明,CTOGP在大鼠体内作用1h可以显著提高血清ALP水平;CTOGP治疗去卵巢的骨质疏松模型大鼠,观察到CTOGP能阻止骨量减少,降低骨小梁受损的程度。本实验对CTOGP活性和作用机理的研究,为其进一步应用于临床治疗OP提供了理论和实验依据。
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