【摘 要】
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目的:观察异硫氰酸苯乙酯（PEITC）对猪肾细胞系（PK-15）的毒性作用,探讨内质网应激在PEITC诱导PK-15细胞凋亡中的作用机制。方法:本实验以PK-15为研究对象,用PEITC（2.5,5,10μM）处理PK-15细胞24小时,进行以下实验:（1）细胞毒性:使用MTT法检测细胞活力,倒置显微镜观察细胞形态;（2）氧化损伤:通过荧光检测活性氧（ROS）的含量,用检测试剂盒检测细胞中超氧化物
【基金项目】
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国家重大研发专项-饲料抗营养因子监测、消减及其资源利用技术研究[5026301-1516001]；
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目的:观察异硫氰酸苯乙酯（PEITC）对猪肾细胞系（PK-15）的毒性作用,探讨内质网应激在PEITC诱导PK-15细胞凋亡中的作用机制。方法:本实验以PK-15为研究对象,用PEITC（2.5,5,10μM）处理PK-15细胞24小时,进行以下实验:（1）细胞毒性:使用MTT法检测细胞活力,倒置显微镜观察细胞形态;（2）氧化损伤:通过荧光检测活性氧（ROS）的含量,用检测试剂盒检测细胞中超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）、过氧化氢酶（CAT）的活性和谷胱甘肽（GSH）、丙二醛（MDA）和乳酸脱氢酶（LDH）的含量;（3）细胞凋亡:流式细胞仪检测PK-15细胞的细胞内钙离子水平、细胞周期和凋亡率;Western blot检测凋亡蛋白caspase 3、9、7、12以及Bcl-2家族蛋白Bcl-2和Bax的表达;（4）内质网应激通路:Western Blot检测内质网应激相关蛋白CHOP,GRP-78,GRP-94,ATF-6,PERK和IRE1-α;内质网应激阻断剂4-PBA对CHOP和GRP78蛋白以及PK-15细胞凋亡率的影响;结果:（1）PEITC作用PK-15细胞24小时后,呈浓度依赖性抑制细胞活力,影响细胞正常形态;（2）PEITC能浓度依赖性降低SOD、CAT、GSH-PX的活性以及GSH的含量,并增加MDA和LDH的含量;（3）PEITC能导致凋亡蛋白caspase3、9、7、12、Bax和内质网应激相关蛋白CHOP、GRP-78、GRP-94、ATF-6、PERK、IRE1-α表达水平升高,Bcl-2蛋白表达水平下降;（4）内质网阻断剂4-PBA作用于PK-15细胞2h后,与PEITC刺激组（10μM）相比,4-PBA组细胞凋亡率下降,CHOP和GRP78蛋白表达水平下降。结论:一定剂量的PEITC对PK-15细胞具有一定的毒性作用,能使PK-15细胞的活力下降,通过诱导ROS和Ca2+在细胞内聚积,诱导细胞发生内质网应激,使细胞周期阻滞在S期和G2/M期,最终引发细胞凋亡。
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