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前额叶皮层是中枢神经系统最晚成熟的皮层,在脑的高级功能中起着非常关键的作用。研究表明,去甲肾上腺素通过激活突触后α2A受体调节前额叶皮层认知功能。树突棘是存在于神经元树突上的细微突起,是大部分兴奋性突触的突触后组分的重要元件,在突触传递和可塑性中发挥重要作用。且有研究指出α2A受体在神经元树突发育中发挥重要作用,但具体作用方式并不明晰。本工作以体外分离培养的大鼠内侧前额叶皮层(mPFC)神经元为对象,运用免疫染色技术、westernblotting、激光共聚焦扫描技术以及基因沉默技术,研究α2A受体在mPFC神经元树突棘的发育和成熟中的作用。主要结果如下:
1.验证了α2A受体在mPFC神经元上有表达。通过免疫荧光技术对体外培养的不同时期的mPFC神经元进行标记,并采用激光共聚焦扫描显微镜进行观察,发现α2A受体在mPFC神经元有丰富的表达。
2.对体外培养的mPFC神经元施加α2A受体选择性激动剂guanfacine,发现神经元树突分支的长度和数量显著增加,证明激活α2A受体可促进mPFC神经元树突的生长。
3.施加α2A受体选择性激动剂guanfacine不改变突触前膜蛋白SynapsinI的表达,但显著增加突触后PSD95的表达。
4.成功构建了α2A受体干扰质粒,并对干扰效果进行了验证;成功构建了α2A受体慢病毒干扰载体,为进一步研究α2A受体在大鼠mPFC神经元树突棘发育中的作用机制奠定了基础。