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前列腺素（Prostaglandins,PGs）是哺乳动物体内广泛存在的一种生理活性物质,参与多种生殖相关活性物质的分泌。牛子宫内膜中主要存在有前列腺素E2（Prostaglandin E2,PGE2）和前列腺素F2α（Prostaglandin F2α,PGF2α）。近年来,有文献报道在人子宫内膜PGE2和PGF2α可以通过促进与修复有关的生长因子的表达进而调控人子宫内膜的修复。但PGs是否对牛子宫内膜的修复有相同的作用还不得而知。本研究以奶牛子宫内膜上皮细胞为研究对象,探讨了前列腺素EP2受体（Prostaglandin EP2 receptor,EP2）激动剂Butaprost和前列腺素FP受体（Prostaglandin FP receptor,FP）激动剂Fluprostenol在奶牛子宫内膜上皮细胞的信号通路以及对于组织修复有关的生长因子的调控作用,具体研究内容如下:1、奶牛子宫内膜上皮细胞细胞培养及前列腺素受体的分析。采用酶消化法和机械法结合的方法成功体外培养出原代子宫内膜上皮细胞,并利用免疫荧光技术对细胞进行了鉴定。采用荧光定量PCR法和Westernblot法检测奶牛子宫内膜上皮细胞PGs受体的种类。结果显示,奶牛子宫内膜上皮细胞中存在EP2和FP受体,并可以被相应的受体激动剂所激活。2、EP2受体激动剂Butaprost对奶牛子宫内膜上皮细胞相关因子表达的影响。设置不同时间点,采用RT-PCR和Westernblot法研究Butaprost对奶牛子宫内膜上皮细胞Vascular endothelial growth factor（VEGF）,Connective tissue growth factor（CTGF）,Transforming growth factor-β1（TGF-β1）和interleukin-8（IL-8）的调控作用。在药物刺激16小时后用RT-PCR和Western blot法检测了EP2受体激动剂Butaprost和EP2受体拮抗剂AH6809对奶牛子宫内膜上皮细胞增殖相关因子表达的影响。采用Western blot法研究了EP2受体激动剂Butaprost在奶牛子宫内膜上皮细胞信号通路,并用RT-PCR和Western blot法检测了PKA信号通路抑制剂H89对奶牛子宫内膜上皮细胞增殖相关因子表达的影响。结果显示Butaprost可以显著增强VEGF的表达,在8h增强最明显。可以显著增强CTGF的表达,16-48h增强显著,蛋白相比基因有一定的滞后性。TGF-β1的表达在8-48h有所增强。可以显著增强IL-8的表达,2-16h表达明显增强。Butaprost刺激奶牛子宫内膜上皮细胞16h后可以增强生长因子的表达,加入EP2受体拮抗剂AH6809后这种增强受到抑制。Butaprost可以激活子宫内膜上皮细胞的PKA和ERK通路,并显著促进奶牛子宫内膜上皮细胞中生长因子的表达,加入PKA信号通路抑制剂后生长因子表达显著下调,说明在奶牛子宫内膜上皮细胞Butaprost通过PKA,ERK信号通路完成对VEGF,CTGF,TGF-β1和IL-8的调控。3、FP受体激动剂Fluprostenol对奶牛子宫内膜上皮细胞相关因子表达的影响。设置不同时间点,采用RT-PCR和Westernblot法研究Fluprostenol对奶牛子宫内膜上皮细胞VEGF,CTGF,TGF-β1和IL-8的调控作用。在药物刺激16小时后用RT-PCR和Western blot法检测了FP受体激动剂Fluprostenol和FP受体拮抗剂AL8810对奶牛子宫内膜上皮细胞增殖相关因子表达的影响。采用Western blot法研究了FP受体激动剂Fluprostenol在奶牛子宫内膜上皮细胞信号通路,并用RT-PCR和Western blot法检测了PKC信号通路抑制剂对奶牛子宫内膜上皮细胞增殖相关因子表达的影响。结果显示在Fluprostenol调控生长因子的时效关系试验中Fluprostenol可以显著增强VEGF的表达,在8h增强最明显。CTGF在加入Fluprostenol刺激后2-48h的表达增强,TGF-β1的表达在4-48h都有所增强,IL-8在2-16h表达明显增强。Fluprostenol刺激奶牛子宫内膜上皮细胞16h后可以增强生长因子的表达,加入FP受体拮抗剂AL8810后这种增强受到抑制。Fluprostenol可以显著激活子宫内膜上皮细胞的PKC和ERK通路,并显著促进奶牛子宫内膜上皮细胞中生长因子的表达。加入PKC信号通路抑制剂后生长因子表达显著下调,说明在奶牛子宫内膜上皮细胞Fluprostenol通过PKC,ERK信号通路完成对VEGF,CTGF,TGF-β1和IL-8的调控。实验结论:（1）经免疫荧光法鉴定,成功体外培养出奶牛子宫内膜上皮细胞并验证在牛子宫内膜上皮细胞中存在EP2受体和FP受体并可以被相应的受体激动剂激活。（2）阐明了EP2受体激动剂Butaprost和FP受体激动剂Fluprostenol在奶牛子宫内膜上皮细胞可分别促进自身受体（EP2,FP）的表达。（3）阐明Butaprost和Fluprostenol在奶牛子宫内膜上皮细胞,促进与组织修复有关的VEGF、CTGF、TGF-β1、IL-8等细胞因子以及COX-2的表达。（4）证实了在奶牛子宫内膜上皮细胞,Butaprost所致各类因子的促表达作用是通过EP2-PKA-ERK途径实现的调控作用,Fluprostenol所致各类因子的促表达作用是通过FP-PKC-ERK途径实现的调控作用。