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选题依据:抑郁症是一种常见的严重危害身心健康的情感障碍性精神疾病。具有发病率高、复发率高以及致残率高三大特点。到2010年将成为世界上第二大疾病负担源[1]，越来越受到医药界的重视。但是抑郁症的诱因很多，发病机制复杂，现有的抗抑郁西药治疗谱窄、耐受性差、毒副反应大、合并用药容易发生药物相互作用，影响病人依从性以及药物的疗效。逍遥散作为常用的经典名方其疗效已经得到了充分的肯定，且无上述西药治疗抑郁症的缺陷，但是逍遥散的抗抑郁作用机理尚不十分完善，这也是中医药现代化的一个瓶颈问题。代谢组学作为系统生物学的重要组成部分，与中医药整体、辨证的观点一致，为中医药治疗复杂疑难疾病的作用机理研究提供了新的方法和思路。 目的:①建立抑郁症动物模型，对模型复制失败进行原因查找和结果分析。②建立尿样GC-MS测定方法，并对氯甲酸乙酯(ECF)和N-甲基-N-三甲硅基三氟乙酰胺+三甲基氯硅烷1％(MSTFA+TMCS1％)两种衍生化试剂的优缺点进行比较，对离子阱和四级杆质量分析器的分析效果进行评价。③运用代谢组学的思路对抑郁症的发病机理进行初步研究，并验证慢性不可预知应激抑郁模型(CUMS)的最佳造模时间。通过给药组的比较确定逍遥散的治疗效果，逍遥散与阳性药文拉法辛和百忧解比较为逍遥散的作用机制的阐明提供基础，增加造模恢复期以观察逍遥散在造模完成后继续给药的效果。 方法:选用健康雄性成年SD大鼠48只，体重200±20g，分为8个组，每组6只:正常对照组(ns)、慢性不可预知应激抑郁模型组(ms)、百忧解组(yb)、文拉法辛组(yw)、逍遥散高剂量组(hx)、逍遥散中剂量组(mx)、逍遥散低剂量组(lx)和逍遥散散剂组(sj)。对于给药组每日造模前给药，21天后停止刺激，继续给药一周。在第1、7、14、21、28天取大鼠12h(20:00-8:00)尿液，对21天所有组的尿液以及模型组、空白组和逍遥散中剂量组从1d、7d、14d、21d到28d的动态进行GC-MS分析，通过XCMS软件对得到的GC-MS数据与处理后采用SIMCA-P软件进行多元统计分析，主要有主成分分析(PCA)、偏最小二乘法-显著性分析(PLS-DA)和正交偏最小二乘法-显著性分析(OPLS-DA)。通过已有的代谢组学数据库、文献及标准品对找到的生物标志物进行结构确定，并对其生理生化作用以及代谢途径进行分析，从而初步阐释抑郁症发病机理及逍遥散抗抑郁作用机制。 结果:对模型复制失败分析的结果①行为学分析结果显示:在大部分指标中，ms组造模前后没有显著性差异，而ns组在造模前后却有显著性差异。ms和ns组造模21天只有垂直有显著性差异，其他均无差异。因此从行为学上看，模型复制不理想。②解剖学:空白组大鼠的肾脏与正常肾脏相比，颜色发青，表面有白色颗粒，与正常肾脏明显不同。说明实验动物肾脏有病变。③病理学:空白组大鼠的肾脏组织出现纤维化并伴有炎细胞浸润，有大量尿酸盐结晶，可见颗粒管型。④三聚氰胺含量测定:在大鼠的两批饲料中均检测到了三聚氰胺。 尿样GC-MS测定方法的建立①经考察此方法准确、稳定、可靠。②对ECF和MSTFA+TMCS1％两种衍生化试剂进行对比发现采用MSTFA+TMCS1％作为衍生化试剂更有助于后续工作的进行。③对离子阱和四级杆质量分析器进行评价，两种方法均符合测定要求，选择其中一种即离子阱质量分析器对样本进行测定。 逍遥散抗抑郁作用分析结果①正常对照组(ns)与模型组(ms)的多元统计分析结果显示:两组在21天的PLS-DA散点图中各自聚为一类，组间达到明显的分离，找到了引起组间差异的17个生物标志物并进行结构指认。正常对照组(ns)与模型组(ms)的动态分析结果显示，造模21天时代谢物的变化最大。②正常对照组(ns)、模型组(ms)、逍遥散高剂量组(hx)、逍遥散中剂量组(mx)、逍遥散低剂量组(lx)和逍遥散散剂组(sj)的多元统计分析结果显示:散剂组离模型组最近，高剂量组离正常对照组最远。其中中剂量组与模型组的PLS-DA散点图中两者达到很好的分离，找到了引起组间差异的17个生物标志物并进行结构指认。③正常对照组(ns)、模型组(ms)、文拉法辛组(yw)和百忧解组(yb)的多元统计分析结果显示:文拉法辛组离正常对照组最近，百忧解组离模型组最近。正常对照组(ns)、模型组(ms)、文拉法辛组(yw)和逍遥散中剂量组(mx)的多元统计分析结果显示:逍遥散中剂量组与正常对照接近，而文拉法辛组与模型组接近。④逍遥散中剂量组(mx)从第1d、7d、14d、21d到28d的动态分析结果显示:21d与1d距离较远，28d较21d与1d更为接近。 机理探讨结果①抑郁症的发病很可能与神经递质、免疫和能量代谢有关。②逍遥散可以通过调节神经递质、免疫和能量代谢使抑郁状态恢复正常。5-羟色胺再摄取抑制作用是其可能的作用靶点之一。 结论:本文成功的复制了慢性不可预知应激抑郁模型。采用对结构指认更方便的MSTFA+TMCS1％作为衍生化试剂，在不影响分析的情况下应用离子阱质量分析器进行样品的测定，建立了尿样GC-MS测定方法。并运用代谢组学的思路对抑郁症的发病机制及逍遥散的抗抑郁作用机理进行初步阐释，在此过程中发现逍遥散中剂量组的抗抑郁效果最好，优于阳性药文拉法辛，与阳性药相比逍遥散具有多靶点、整体调节的作用，可以从能量代谢、神经递质以及免疫方面对抑郁症进行综合调节，使抑郁症患者恢复健康。代谢组学与中医药整体、辩证的观点一致，为中医药治疗复杂疑难疾病的作用机理研究提供了新的方法和思路。