猪Ghrelin基因的克隆、原核表达及Ghrelin蛋白多克隆抗体的制备研究

来源 :华中农业大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:liunian2008
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Ghrelin是由28个氨基酸组成的第一个生长激素促分泌素受体的内源性配体,最早是由Kojima等在小鼠和人的胃内分泌细胞及下丘脑弓状核中发现的。因其具有促进垂体前叶生长激素的分泌的作用而命名为Ghrelin。Ghrelin是目前为止除了生长激素释放激素和生长抑素外,第二个调节生长激素分泌的内源性物质。Ghrelin主要合成于胃和肠,垂体、下丘脑、胎盘、肾脏和胰腺等亦有少量合成。根据现有的资料分析,Ghrelin除调节生长激素分泌外,还有增加食欲,调节能量平衡,促进胃酸分泌等作用。根据Genbank中检索猪prepro ghrelin mRNA序列,设计了猪Ghrelin原核表达引物。通过RT-PCR技术扩增猪的Ghrelin cDNA,将其与pMD18-TVector连接,转化入大肠杆菌经鉴定正确后,回收目的片段与原核表达载体pET28a(+)相连接,构建了猪Ghrelin的原核表达系统,获得了重组菌分泌的猪Ghrelin原核表达多肽。以纯化的包涵体蛋白与不完全福氏佐剂氢氧化铝佐剂混合研磨均匀后免疫新西兰大白兔,获取了兔抗猪Ghrelin免疫血清,经Western-blot方法检测,获得了猪Ghrelin的多克隆抗体。这些研究将为Ghrelin各方面进一步的研究奠定了基础。
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