关于蓝细菌Anabaena sp.PCC 7120中钙泵基因的初步研究

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异型胞是高度分化的蓝细菌细胞,是在有氧外界环境下进行细胞内生物固氮的场所。异型胞的发育和功能行使可能涉及到600-1000个基因,约占蓝细菌基因组的15%-25%。已知Ca2+对异型胞分化有重要作用,而目前对Ca2+及钙泵蛋白在蓝细菌异型胞分化上的研究还非常不足。 通过序列同源性比对,我们在蓝细菌Anabaenasp.PCC7120基因组中找到3个推测的钙泵基因,并分别构建了双重组缺失突变转化载体。通过三亲交配转化和一系列的筛选鉴定,我们得到了其中两个基因(all3245、alr3723)的纯合缺失突变体,进而对相关的生理生化过程进行了检测。初步证明了这两个基因确实为钙泵。 我们分别构建了钙泵基因在铜诱导启动子PpetE下、在钙泵基因自身启动子下以及在hetR启动子下的表达载体和在铜诱导启动子PpetE下的反向转录载体。通过三亲交配转化,分别得到了钙泵基因的过量表达菌株和反向转录菌株。减氮诱导后,发现利用petE启动子的过量表达突变体表现出了较低的异型胞分化频率。 综合以上实验结果我们推测蓝细菌Anabaenasp.PCC7120存在的多个钙泵基因之间有功能的相似性,单一钙泵的缺失,并不能直接导致细胞内钙浓度的明显变化,因而不会简单的引起生理表型上实质性变化。但钙泵基因的过量表达,可能会导致细胞内钙浓度的降低,从而引起异型胞分化频率下降。 本研究对于丰富人们对于Ca2+及钙泵蛋白在原核细胞(尤其是蓝细菌)中生理功能的了解有积极作用。
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