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弓形虫又名刚地弓形虫(Toxoplasma gondii,T.gondii),是一种胞内寄生原虫,可以感染几乎所有温血动物的有核细胞。它的宿主广泛,猫科动物是其终末宿主,中间宿主包括哺乳类、鸟类、爬行类、鱼类等超过200种动物。弓形虫病是由弓形虫感染宿主引起的人兽共患寄生虫病,在全世界范围内流行,据统计全球约有30%的人感染弓形虫。在人类中,弓形虫感染健康的人可能没有明显的症状,但在感染孕妇、免疫低下和缺陷的人时会出现严重的症状。在动物中,弓形虫会引起组织感染和严重疾病,甚至死亡,严重影响畜牧生产和食品安全。弓形虫的预防以早期检测为主,检测方法有很多种。但由于弓形虫的基因型多样,表面抗原众多,非常容易造成漏检、假阳性等情况,对弓形虫病的防控造成了阻碍。因此快速、准确的弓形虫病检测方法具有重要的研究意义。改良凝集实验(Modified agglutination test,MAT)作为国际上公认的弓形虫检测的“金标准”,具有准确率高,特异性好,方法简便等众多优点,是最常用的检测方法之一。但由于国外市场垄断,导致进口MAT试剂盒的成本高,时效性差,而国内仍没有商品化的MAT试剂盒售卖。本实验首先对MAT试剂盒进行了制备和改良,对试剂盒的抗原种类、虫体密度、抗体效价、阴阳性判定标准、反应最适p H和时间方面进行了摸索和改良,并对试剂盒的检测效果、特异性、稳定性等方面进行了检测。选定了试剂盒作为抗原的虫株为RH株,最佳虫体密度为2.5×10~8,抗体效价为1:2~8,最适p H为8.5～9,最佳反应时间为15 h～24 h,并对阴阳性判断标准进行确定。应用其他寄生虫感染血清进行了特异性实验,用91份人血清、290份猪血清、63份小鼠血清对其进行了效果检测,并与ELISA和进口MAT试剂盒进行对比,同时对重复性和稳定性进行了评估,结果表明制备的MAT试剂盒对弓形虫感染血清均有良好的反应效果,与疟原虫,布氏锥虫感染血清均不反应,检出率高于ELISA,准确率与进口MAT试剂盒相同,重复性好,可保存半年以上。最后,应用制备的MAT试剂盒对长春地区998份人血清和大庆地区512份人血清进行了弓形虫流行病学调查,结果显示,长春地区弓形虫感染率为23.8%,大庆地区感染率为24.2%,均高于早前全国寄生虫病普查中弓形虫的感染率,推测东北地区弓形虫实际感染状况可能有所升高,需要引起重视。综上所述,本实验成功制备出了准确率高、特异性好、成本低、操作简单的MAT试剂盒,对临床快速检测和预防弓形虫病具有重要意义。