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PARTⅠ人偏肺病毒分离株蛋白质特性的初步探讨目的:分析新近发现的儿童呼吸道病毒病原——人偏肺病毒(Human metapneumovirus, hMPV)中国大陆流行株,初步明确人偏肺病毒(human metapneumovirus ,hMPV)主要蛋白质的基本特性。方法:以纯化的hMPV重庆分离株CHN05-01灭活病毒为抗原,免疫家兔获得抗血清。用此抗血清为一抗通过免疫印迹法检测hMPV蛋白。用NetNGlyc 1.0 Server、NetOGlyc 3.1 Server、NetPhos 2.0 Server分析hMPV A亚型标准株CAN97-83氨基酸序列,预测hMPV蛋白氨基酸序列中可能的糖基化、磷酸化位点。结果:ELISA检测显示所制备的抗血清与hMPV的蛋白反应效价达1:500以上,可有效识别hMPV蛋白。软件分析示G蛋白糖基化位点最多,而P蛋白磷酸化位点最多。以兔抗hMPV血清为一抗的免疫印迹法提示CHN05-01的G蛋白糖基化水平较一致,与CAN99-80和CAN99-81不同,其分子量介于55至72kDa之间,约68 kDa;F蛋白F1亚单位分子量介于40至55kDa,约为48 kDa。结论:初步明确了hMPV两个主要膜表面糖蛋白的分子量和糖化特点,为后续蛋白功能研究奠定了基础。PARTⅡ人偏肺病毒F蛋白的糖基化和磷酸化位点预测目的:预测人偏肺病毒F蛋白的糖基化、磷酸化位点。方法:应用神经网络分析预测hMPV 4亚型代表株F蛋白氨基酸序列的N-连接、O-连接糖基化位点、赖氨酸残基的ε氨基的糖基化位点和磷酸化位点。结果: 4亚型代表株F蛋白均有的保守N-连接糖基化位点、赖氨酸残基ε氨基的糖基化位点和磷酸化位点。无相同的保守的O-连接糖基化位点。A2亚型株4个区段可能无糖基化和磷酸化位点。结论:应用神经网络分析预测了F蛋白的糖基化和磷酸化位点,为进一步研究hMPV蛋白糖基化的功能及免疫学意义的研究奠定了理论基础,获得了多肽疫苗开发的不需修饰的候选区。