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山葡萄(Vitis amurensis Rupr.)是葡萄属中最抗寒的一个种,对多种欧亚种群易感的病害都有较强的抵抗力。它是目前国内外葡萄抗寒和抗病育种的主要种质资源。而野生山葡萄一般为雌雄异株,两性花类型极为罕见。本研究以山葡萄‘左山一’x‘043’杂交F1代群体为试材,利用SSR分子标记技术结合BSA(集群分离分析法),进行与山葡萄性别相关的定位研究,以实现山葡萄性别的早期鉴定,加快山葡萄育种进程。本研究取得了以下主要结果:1.应用SSR-PCR技术筛选出两对具有父母本特异性条带的SSR引物,对117株杂交后代进行杂种真实性鉴定,有108株杂交后代中出现了清晰、稳定的亲本特异型条带,结合田间形态学观察,确定真杂种率为92.3%。2.采用SSR分子标记结合BSA技术对山葡萄‘左山一’和‘043’杂交F1代进行性别差异基因筛选。首先构建雌雄基因池(各20株),然后用190对微卫星引物对其进行扩增,发现3对引物(VMC3B10F、Y-2-11B和VMC2C10-1)能在雌性基因池间扩增出特异性条带。用构建基因池的40株个体对3对引物进行个体验证,3对引物在40株个体上均能扩增出条带,且这3对引物均根据葡萄参考基因组上2号连锁群信息设计,因此推判为控制山葡萄性别位点的基因位于2号连锁群。3.将葡萄2号连锁群上设计而来的59对引物在亲本‘左山一’和‘043’上扩增,共筛选出多态性引物9对,将这9对引物在F1代共108株个体上进行SSR标记分析,并用Joinmap3.0进行连锁群的构建,2号连锁群上有4个标记上图,距离性别位点最近的两个标记位点为VMC3B10和Y-2-11B,与性别位点的距离分别是2cM和7cM。4.基于SSR分子标记与重测序BSA分析结果均表明,山葡萄性别决定位点位于2号连锁群上。结合SSR分子标记与重测序BSA分析结果,可以将性别位点定位的区域缩小至5082666bp至5740001bp之间,约650kb的范围内。