大麻素WIN55,212-2对BEL-7402肝癌细胞增殖、迁移的影响及分子机制研究

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近年来,大量研究表明,大麻素具有抗肿瘤作用,人工合成大麻素WIN55,212-2(WIN)可以降低BEL7402肝癌细胞的活力、抑制增殖以及诱导其凋亡,过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)发挥了巨大作用,大麻素 WIN能停滞前列腺癌 LNCap细胞的细胞周期,大麻素能够抑制肺非小细胞瘤的生长、迁移,但是目前还没有相关报道指出 WIN是否会对BEL7402细胞的细胞周期和迁移的影响及其可能机制,而且WIN抗肿瘤的机制还没有被完全阐明。  目的:探讨大麻素WIN对BEL-7402细胞的细胞周期、增殖和迁移的影响,对其机制进行初步研究,为寻找治疗肝癌的靶向药物提供依据。  方法:使用CCK-8试剂盒检测不同浓度大麻素WIN对BEL-7402细胞活力的影响,碘化丙啶(PI)单染色法检测大麻素WIN对BEL-7402细胞的细胞周期分布的影响,western blot法检测大麻素WIN对周期相关蛋白表达的影响。分别用划痕迁移法和transwell小室法检测不同浓度大麻素WIN对BEL7402细胞在水平和垂直面上的迁移能力变化,western blot法检测不同浓度大麻素WIN对BEL7402细胞迁移相关蛋白表达的影响。使用CCK-8试剂盒检测不同浓度CB2受体选择性拮抗剂AM630对BEL-7402细胞活力的影响,分别用PI单染色法和western blot法检测CB2受体选择性拮抗剂AM630对BEL7402细胞的细胞周期及ERK1/2表达的影响。使用CCK-8试剂盒检测不同浓度CB2受体选择性激活剂JWH-015对BEL-7402细胞活力的影响,用western blot法检测CB2受体选择性激活剂JWH-015对BEL7402细胞的ERK1/2表达的影响。使用CCK-8试剂盒检测不同浓度 ERK1/2选择性抑制剂PD98059对BEL-7402细胞活力的影响,分别用PI单染色法和western blot法检测ERK1/2选择性抑制剂PD98059对BEL7402细胞的细胞周期及细胞周期相关蛋白的影响。  结果:WIN处理后,BEL-7402细胞的活力降低,细胞周期停滞在G1期,细胞增殖受到抑制,BEL7402细胞的水平迁移能力及垂直迁移能力均受到抑制,且具有剂量依赖性。Western blot结果显示,WIN处理后,BEL-7402细胞中,全长基质金属蛋白酶9(MMP9)、切割MMP9蛋白质、ERK1/2蛋白质磷酸化水平、Rb蛋白质磷酸化水平、cyclin D1蛋白质、CDK4蛋白质及转录因子E2F1的表达水平均下调,p27蛋白质的表达水平上调,且具有剂量依赖性。CB2受体选择性拮抗剂AM630处理后,BEL-7402细胞的活力下降,且具有剂量依赖性。CB2受体选择性拮抗剂AM630减弱了WIN引起的细胞周期停滞效应,同时减弱了WIN对ERK1/2磷酸化水平的下调作用。CB2受体选择性激动剂JWH-015处理BEL7402细胞,细胞的活力下降,且具有剂量依赖性。JWH-015同WIN一样可以下调BEL7402中ERK1/2的磷酸化水平。ERK1/2选择性抑制剂 PD98059处理后,BEL7402细胞的活性下降,具有剂量依赖性。PD98059同WIN一样可以将BEL7402细胞停滞在G1期,并上调p27蛋白质表达水平、下调cyclin D1蛋白质表达水平。  结论:大麻素WIN能够停滞BEL-7402细胞的细胞周期、抑制细胞增殖及迁移,ERK1/2在这些效应中发挥重要的信号传导作用。CB2受体在WIN引起的ERK1/2磷酸化水平下调、细胞周期停滞、细胞增殖抑制以及细胞迁移抑制中起了重要作用。ERK1/2在WIN引起的cyclin D1表达下调效应中发挥着一定的作用。
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