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第一部分ACS患者外周血CD4+CD25+GARP+Tregs数目减少功能降低目的：动脉粥样硬化(AS)是一种炎症性和免疫反应相关的疾病。调节性T细胞(Tregs)是一群能够抑制T细胞活化的细胞群,其在AS发病中起着保护作用。然而,迄今未发现Tregs的特异性标志,直到最近发现的以糖蛋白A为主的重复序列(GARP),该膜蛋白被认为是活化的Tregs的特异性标志分子。因此,在我们的研究中,我们利用GARP作为Tregs的标志。方法：为了阐述GARP+Tregs是否在急性冠脉综合征(ACS)患者体内下调,我们检测了CD4+CD25+GARP+T细胞的数目、其抑制T细胞活化增殖的功能、及其与之相关的细胞因子。另外,我们比较了GARP和FOXP3的表达,前者被认为是更敏感的Tregs的标志。结果：ACS患者循环中CD4+CD25+GARP+Tregs的数目减少。ACS患者CD4+CD25+GARP+Tregs的抑制功能较稳定型心绞痛(SA)和正常冠脉者(NCA)降低,与之相关的细胞因子水平也较AS及NCA对照组降低。另外,ACS患者外周血单个核细胞(PBMC)经TCR刺激后其中CD4+CD25+GARP+Tregs较SA组和NCA组低。结论：这些结果表明,ACS患者循环中CD4+CD25+GARP+Tregs受损,上调GARP可能会增强ACS患者体内Tregs的保护功能。第二部分GARP基因过表达慢病毒载体与基因沉默慢病毒载体的构建与筛选目的：过表达GARP能赋予初始T细胞部分调节性T细胞的表型及功能,本实验构建GARP基因过表达慢病毒载体与基因沉默慢病毒载体,作为进一步研究GARP在动脉粥样硬化发病机制研究中的工具。方法：将人GARP/LRRC32基因克隆在表达绿色荧光蛋白(GFP)的人类免疫缺陷病毒来源的载体(HDV)上,设计出3个针对GARP的RNA干扰序列,并分别将其克隆在HDV上,利用RTPCR筛选有效的基因过表达慢病毒载体与基因沉默慢病毒载体。结果：转染了慢病毒过表达载体的活化的CD4+CD25-T细胞GARP mRNA表达水平升高,3个RNA干扰片段中有2个可有效下调活化的CD4+CD25+T细胞表达GARP。结论：我们成功构建了两个有效的针对活化CD4+CD25+T细胞中GARP的RNA干扰序列和一个有效的GARP基因过表达慢病毒载体。