一种新的X-脯氨酰-二肽氨肽酶克隆、表达、纯化与应用研究

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活性肽表达和加工技术是制约长度为30-70氨基酸的活性肽研究开发的"瓶颈"技术.该实验室已经建立了一套能够高效表达和加工长度为30-70Aa多肽的新系统,应用该系统,几种活性肽能在同一生产线上联合生产.在这一系统中,X-脯氨酸-二肽氨肽酶完成最后一步加工,它的制备是整个系统的关键.我们用PCR的方法从Lactococcus lactis的染色体DNA中克隆到一种新的X-脯氨酸-二肽氨肽酶基因.测序后发现,该基因与已报道Lactococcus lactis来源的X-脯氨酸-二肽氨肽酶基因有90﹪的同源性,但在其活性中心Ser<348>附近也具有G-X-S-Y-X-G保守结构.通过基因工程菌的表达、纯化与酸水解,我们得到了Pro-Pro-glucagon.用重组X-脯氨酸-二肽氨肽酶对其进行水解,切除N端的Pro-Pro,使融合蛋白具有天然活性.利用高效毛细管电泳法检测酶切的效果.我们还对酶切前后两种多肽对小鼠血糖的影响,证明酶切的效果与意义.
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