乙醇酸氧化酶（Glycolate oxidase，简称GLO）是光呼吸代谢的关键酶，在它的作用下乙醇酸氧化生成乙醛酸和过氧化氢。目前对于乙醇酸氧化酶的亚基组成，分子结构，蛋白的亚细胞定位等都还没有明确的研究结论。生物信息学分析表明水稻中有六个GLO的相似序列，分别位于三号、四号、七号和八号染色体上，其中四号和八号染色体的两个序列的起始密码子还没有被识别，都缺失5’端的一段序列，因此本文研究的是其中四个已经明确的GLO基因，分别命名为GL01，GL03，GL04，GL05。本文分别构建这四个基因的荧光蛋白表达载体和双分子荧光互补表达载体，利用拟南芥和水稻原生质体瞬时表达系统研究不同GLO基因编码蛋白的亚细胞定位和蛋白之间的相互作用。获得的主要实验结果如下：　　 1.GL01，GL03，GL04和GL05荧光蛋白表达载体的构建　　 从水稻叶片和根中提取总RNA，根据GL01，GL03，GL04和GL05的基因序列分别设计特异引物，通过RT-PCR从水稻叶片的eDNA中扩增得到GL01和GL04，从水稻根的eDNA中扩增得到GL03和GL05。将四个基因分别插入黄色荧光蛋白(YFP)表达载体和蓝色荧光蛋白(CFP)表达载体。将构建好的载体转化大肠杆菌后，经双酶切检测确定目的基因已经插入到了相应的荧光蛋白表达载体中。　　 2.几种GLO蛋白的亚细胞定位　　 将目的基因的荧光蛋白表达载体与带有过氧化物酶体定位信号的荧光蛋白表达载体共转化拟南芥叶肉细胞原生质体或水稻茎原生质体得到了相同的结果。在一定的激发光激发下，四个基因的融合荧光蛋白发出点状的荧光，与带有过氧化物酶体定位信号的载体所发荧光可以完全重合，可以认定四个基因的蛋白产物都是定位于过氧化物酶体中。　　 3.GL01，GL03，GL04和GL05双分子荧光互补(BiFC)表达载体的构建　　 以上述实验中构建的四个基因的荧光蛋白表达载体为模板，根据GL01，GL03，GL04和GL05的序列分别设计特异引物，通过PCR扩增得到四个基因的ORF片段。将GL01，GL03和GL04插入NYFP表达载体；GL01，GL03，GL04和GL05插入CYFP表达载体。将构建好的载体转化大肠杆菌后，经双酶切检测确定目的基因已经插入了相应的表达载体。　　 4.几种GLO蛋白之间的相互作用　　 与NYFP连接的表达载体和与CYFP连接的表达载体分别两两组合共转化水稻茎原生质体，在一定的激发光激发下，荧光显微镜下观察的结果显示：GL01-NYFP与GL03-CYFP，GL01-NYFP与GL04-CYFP，GL03-NYFP与GL04-CYFP共转化之后，呈现点状的荧光图像，而其他几种组合共转化水稻茎原生质体后则不发荧光。由此可以认为：GL01与GL03基因，GL01与GL04基因，GL03与GL04基因所表达的蛋白分别可以相互作用，可两两互作；而其它几种酶蛋白之间可能不能发生相互作用，GL01，GL03和GL04基因所编码的蛋白很可能就是组成乙醇酸氧化酶的亚基。