阿那其根醇提取物对咳嗽变异性哮喘体内作用及机制研究

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目的:研究阿那其根醇提取物(Ethanol Extract of root of Anacyclus Pyrethrum,EEAP)对咳嗽变异性哮喘(Cough variant asthma,CVA)模型大鼠的抗炎和抗氧化作用机制。方法:将90只大鼠,随机分为正常对照组(饮用水)、模型组、EEAP高剂量组(640 mg·kg-1)、中剂量组(320 mg·kg-1)、低剂量组(160 mg·kg-1)和醋酸泼尼松组(2.5 mg·kg-1),采用卵清蛋白(OVA)诱导大鼠咳嗽变异性哮喘模型,比较大鼠咳嗽次数;观察肺和肾组织病理变化;瑞氏染色法对肺泡灌洗液中炎性细胞进行计数和分类;ELISA法测定各组大鼠血清中白介素4(IL-4)、白介素5(IL-5)、白介素6(IL-6)、白介素13(IL-13)、活性氧族(ROS)、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、肿瘤坏死因子(TNF-α)、干扰素γ(IFN-γ)以及大鼠肺肾组织中超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)的含量;流式细胞术(FCM)检测树突状细胞(DCs)表面CD80、CD86共刺激分子的表达;采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)法检测各组大鼠肺肾组织中TLR4和NF-κB(p65)mRNA的表达;采用蛋白免疫印迹法(Western Blot)法检测各组大鼠肺肾组织中TLR4、NF-κB(p65)、Trx、GSK-3β、ρ-GSK-3β、β-catenin、ρ-β-catenin和4-HNE的蛋白表达。结果:与模型组比较,醋酸泼尼松组和EEAP各剂量组均能不同程度降低CVA大鼠咳嗽次数,减轻肺部和肾炎性细胞的浸润。同时,醋酸泼尼松组和EEAP各剂量组均能显著性升高SOD和IFN-γ含量(P<0.05),显著降低IL-4、IL-5、IL-6、IL-13、ROS、GM-CSF、TNF-α和MDA含量(P<0.05),EEAP各剂量组与醋酸泼尼松组无显著性差异;此外,EEAP各剂量组均能显著降低DC表面的CD80、CD86共刺激分子的表达(P<0.05);EEAP各剂量组均能显著降低TLR4/NF-κB(p65)信号通路表达(P<0.05),显著降低Wnt信号通路中ρ-GSK-3β、β-catenin、4-HNE的蛋白表达和明显升高Trx、GSK-3β和ρ-β-catenin的蛋白表达(P<0.05)。各给药组之间无显著性差异(P>0.05)。结论:EEAP可能是通过抑制IL-4、IL-5、IL-6、IL-13、ROS、GM-CSF、TNF-α、MDA、TNF-α和升高IFN-γ、SOD水平,下调DC表面的CD80、CD86共刺激分子的表达,可能通过下调TLR4/NF-κB(p65)信号通路表达及Wnt信号通路ρ-GSK-3β、β-catenin、4-HNE的蛋白表达水平和上调Wnt信号通路Trx、GSK-3β和ρ-β-catenin的蛋白表达起到抗炎、平喘作用。
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