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目的建立小鼠衰老模型,研究干酪乳杆菌是否具有抗氧化、保护肠黏膜及调节肠道菌群的作用,探索干酪乳杆菌与衰老之间的关系。方法1.动物模型建立及分组:昆明种SPF级雄性小鼠,共75只,体重(20±2)g,按体重随机分为空白组(15只)和模型组(60只)。模型组颈背部皮下注射D-半乳糖,剂量为400 mg/kg/d,持续6周,建立衰老模型。然后模型组剪尾取血,并根据硫代巴比妥酸法(TBA法)所测红细胞中丙二醛(MDA)水平,将衰老模型组重新分组,随机分为模型组(10 m L/kg/d双蒸水灌胃)、干酪乳杆菌干预剂量1、2组(5、10m L/kg/d干酪乳杆菌灌胃),维生素E阳性对照组(80 mg/kg/d维生素E灌胃);正常对照组以10 m L/kg/d双蒸水灌胃。除正常对照组外其余各组继续颈背部皮下注射D-半乳糖,持续30天。最后一次灌胃后,用代谢笼收集小鼠粪便,用乙醚麻醉小鼠,采用摘眼球法取血,同时摘取肝脏和小肠。2.抗氧化指标检测:采用彗星电泳实验(单细胞凝胶电泳实验)检测小鼠外周血中淋巴细胞DNA损伤水平,利用TBA法检测小鼠红细胞中MDA含量,DNPH比色法(2,4-二硝基苯肼法)检测小鼠肝组织中蛋白质羰基含量,DTNB法(二硫代二硝基苯甲酸法)检测小鼠肝组织中GSH(还原型谷胱甘肽)含量及GSH-PX(谷胱甘肽过氧化物酶)活性。3.肠道屏障功能检测:利用透射电镜观察小鼠小肠黏膜组织超微结构的变化,采用ELISA法检测小鼠血清中D-LA(D-乳酸)含量、DAO(二胺氧化酶)活性及FABP2(肠脂肪酸结合蛋白)含量。4.肠道菌群含量检测:采用荧光实时定量PCR法检测各组小鼠粪便中双歧杆菌、乳酸杆菌、大肠杆菌和肠球菌的含量。结果1.与正常对照组相比,模型组淋巴细胞DNA损伤程度明显升高(P<0.05);与模型组比较,干预剂量1、2组及维生素E组DNA损伤率明显下降(P<0.05);与维生素E组比较,干预剂量1、2组DN A损伤情况无明显差异(P>0.05)。2.与正常对照组相比,模型组MDA及蛋白质羰基含量均明显升高(P<0.05);与模型组比较,干预剂量1、2组及维生素E组MDA及蛋白质羰基含量均明显下降(P<0.05);与维生素E组比较,干预剂量1、2组蛋白质羰基含量降低(P<0.05),MDA含量无明显差异(P>0.05)。3.与正常对照组相比,模型组GSH和GSH-PX含量均显著降低(P<0.05);与模型组比较,干预剂量1、2组GSH含量显著升高,干预剂量2组GSH-PX活性组显著升高(P<0.05);与维生素E组比较,干预剂量1、2组GSH和GSH-PX含量均无明显差异(P>0.05)。4.透射电镜观察显示,正常对照组小肠黏膜结构清晰完整,绒毛排列整齐紧密,细胞连接紧密;模型组小鼠小肠绒毛排列紊乱,部分倒伏脱落,细胞连接肿胀,桥粒数量减少;补充干酪乳杆菌及维生素E后,小肠绒毛及细胞连接状况均较模型组明显改善。5.与正常对照组相比,模型组D-LA、DAO及FABP2含量均显著增高(P<0.05);与模型组比较,干预剂量1、2组及维生素E组D-乳酸含量、DAO活性及FABP2含量均显著降低(P<0.05);与维生素E组比较,干预剂量1、2组D-乳酸、DAO及FABP2含量均无明显差别(P>0.05)。6.与空白对照组比较,模型组双歧杆菌、乳酸杆菌及大肠杆菌含量均显著降低(P<0.05);与模型组比较,干预剂量2组双歧杆菌、乳酸杆菌含量升高,肠球菌含量降低;干预剂量1组乳酸杆菌、大肠杆菌含量升高,肠球菌含量降低(P<0.05)。结论1.干酪乳杆菌可以调节肠道菌群,优化菌群结构,提高衰老小鼠抗氧化能力,减轻氧化损伤水平,改善小肠黏膜屏障,降低小肠黏膜通透性,从而起到延缓衰老的作用。2.干酪乳杆菌作为一种有益的益生菌补充剂,对促进人体健康有极大意义,但是其如何通过调节肠道菌群等发挥延缓衰老作用的具体分子机制还需进一步研究。