几株放线菌发酵液抑菌活性成分的研究

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微生物是活性先导化合物及新药最重要的来源之一。放线菌与人类的生活关系极为密切,是一类比其他微生物更为丰富的生物活性物质资源。本文在原有工作的基础上,进一步研究了添加前体物质对放线菌Streptomycesalboflavus313菌株发酵液活性及代谢产物中各成分含量的影响,并对其发酵液中的活性成分进行了进一步的分离和结构鉴定;本文还以菌株SC11、11D2-9和GXWl作为材料,分别从菌株发酵产物的生物活性测定、主要活性代谢产物的分离纯化和结构鉴定、菌株的分类鉴定方面进行了系统的研究,主要研究结果如下:1.研究了添加前体物质对Streptomyces alboflavus313菌株发酵液的抑菌活性及其代谢产物中各成分含量的影响,结果表明发酵液中添加0.5g/L L-谷氨酸钠时,代谢产物m/z750、723、860和743的含量分别比对照提高了10.50倍、22.48倍、16.73倍和12.59倍。2.采用活性追踪的方法,从添加0.5g/L L-谷氨酸钠的S. alboflavus313菌株发酵液中分离得到一个抗菌活性成分,鉴定为一种新颖的环六肽化合物NW-G12。与NW-G01的区别是NW-G12的色氨酸没有被氯化。通过抗菌谱和抑菌活性的比较,发现NW-G01和NW-G12并没有明显的差异。这说明色氨酸上氯原子的有无并不是抑菌活性的决定性因素。同时,从该菌株发酵液中还分离得到了1个活性化合物F2,鉴定为沙漠霉素A。3.研究了化合物NW-G01对番茄灰霉病菌的作用机理。100μg/mL NW-G01处理12h后,菌丝的还原糖、壳聚糖、可溶性蛋白和丙酮酸含量、几丁质酶活性均呈现降低的趋势。4.采用活性追踪的方法,从SC11菌株发酵液中分离得到了1个活性化合物F5。室内生测结果表明,F5对革兰氏阳性菌蜡状芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌有很强的抑菌活性,其MIC值分别为3.9μg/mL、7.8μg/mL和7.8μg/mL;而对革兰氏阴性菌大肠埃希氏菌和铜绿假单胞菌没有明显的抑菌活性,其MIC值均大于250μg/mL。对苹果炭疽病菌、茄子黄萎病菌、小麦赤霉病菌、烟草赤星病菌、西瓜枯萎病菌、油菜菌核病菌、番茄灰霉病菌等主要农作物病原真菌的菌丝生长均有一定程度的抑制作用。根据MS、1H NMR、13C NMR等波谱数据分析,将其鉴定为沙漠霉素A。5.建立了沙漠霉素类化合物的液-质联用分析方法,可以用于抗生素筛选研究中沙漠霉素类化合物的早期识别、排重。6.室内生测结果表明,11D2-9菌株发酵液对革兰氏阳性细菌有较好的抑制作用;对革兰氏阴性细菌无明显的抑制作用;对苹果炭疽病菌、茄子黄萎病菌、小麦赤霉病菌、烟草赤星病菌、西瓜枯萎病菌、油菜菌核病菌、番茄灰霉病菌的菌丝生长无明显的抑制作用;对小麦白粉病菌的保护和治疗效果分别为69.33%和61.93%。采用活性追踪的方法,从11D2-9发酵液中分离得到1个活性化合物F1。根据MS、1H NMR、13C NMR等波谱数据分析,将其鉴定为白利辛霉素。7.室内生测结果表明,GXWl菌株发酵液对革兰氏阳性细菌、革兰氏阴性细菌、植物病原真菌均有一定的抑制作用。采用活性追踪的方法,从GXWl菌株发酵液中分离得到抗菌蛋白条带3-1、3-2,依赖LC-MS/MS技术,将3-1和3-2鉴定为磷酸盐结合蛋白前体。8.采用多相分类法,通过菌株形态特征和培养特征的观察、生理生化指标的测定和16S rDNA序列分析,结果表明,SC11、11D2-9菌株与模式菌株Streptomyces alboflavusNBRC-13196T具有高度的相似性(99%), GXWl菌株与模式菌株Streptomycesrubiginosohelvolus NBRC12912T的同源相似性也为99%。三株菌株与模式菌株的生理生化指标不完全相同,但大多数指标大体一致。因此建议将菌株SC11、11D2-9和GXWl分别命名为Streptomyces alboflavus SC11、Streptomyces alboflavus11D2-9和Streptomycesrubiginosohelvolus GXWl。
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