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禾谷镰刀菌(Fusarium graminearum)是小麦赤霉病主要的致病真菌,寄主范围主要是禾谷类作物。镰刀菌侵染会使产量和品质下降,残留的真菌毒素如玉米赤霉烯酮类(Zearalenone, ZEN)和脱氧雪腐镰刀菌烯醇(Deoxynivallenol, DON)严重危害健康。同时,DON也是重要的致病因子,在小麦的侵染与致病中发挥重要作用。烯酰基辅酶A水合酶(enoyl-CoA hydratase,Ech1)能够降解脂肪酸,是脂肪酸β-氧化的重要过程。但是,在植物病原真菌中了解甚少。为此,我们对禾谷镰刀菌FgEch1进行了研究。 采用生物信息学的方法在禾谷镰刀菌基因组中得到一个FgEch1基因。利用Split-marker的方法构建禾谷镰刀菌FgEch1基因敲除载体,通过PEG介导的原生质体转化法获得FgEch1基因敲除突变体?Ech1和回复菌株?Ech1-C。分析FgEch1基因敲除突变体的相关表型变化, 阐明FgEch1在禾谷镰刀菌中的功能。 突变体具有下列的特征:1)突变体?Ech1对菌落生长没有影响。2)突变体影响短链脂肪酸的利用。在含正丁酸和正己酸的MM培养基上相对生长速率分别下降74.23%、100%,在含肉豆蔻酸、棕榈酸和油酸的MM培养基上的相对生长速率分别下降14.27%、13.12%、8.28%;3)突变体?Ech1影响孢子产量和萌发率。突变体?Ech1相对于野生型菌株产孢量下降了80.19%;分生孢子在6 h和24 h萌发率分别下降56.85%、13.25%;4)突变体对小麦的致病性减弱。小麦穗接种结果发现,突变体的致病能力下降,麦穗接种后病情指数下降86.7%;5)突变体?Ech1对H2O2的胁迫敏感性升高。在含有0、1、5、10mM浓度梯度H2O2的CM培养基上生长,H2O2对菌丝的抑制率分别提高7.533%、8.505%、12.918%; 6)突变体?Ech1和野生型菌株PH-1之间对有性生殖无影响。 上述结果表明,FgEch1对无性生殖,短链脂肪酸的利用和致病性发挥着重要的作用。