论文部分内容阅读
壬基酚(NP)属烷基酚类环境内分泌干扰物,具有拟雌激素样作用,在环境中广泛存在,并可以通过水源、食物链经口或塑料用具经皮肤接触等途径进入机体,对人体健康造成严重影响。目前关于NP毒性的研究主要集中在生殖毒性和免疫毒性方面,鲜有关于NP神经毒性方面的报道,同时已有相关研究表明,桑葚中的活性物质具有解毒的功效。因此本文在研究NP神经毒性的基础上,进一步研究桑葚对其毒性的解毒机制。通过28天短期重复染毒试验建立NP染毒动物模型[对照组:玉米油,NP低、中、高剂量分别为:30、90、270 mg/(kg·bw)],利用旷场实验(OFT)和高架十字迷宫实验(EPM)观察NP的神经行为毒性,同时从NP对大鼠甲状腺功能及单胺类神经递质两方面的影响,探讨NP的神经毒性机制,并选择有明显毒效应的剂量作为桑葚解毒试验的染毒组剂量;将新鲜成熟桑葚真空冷冻干燥后用80%乙醇,以1:15的料液比,超声波辅助提取90 min,减压旋蒸浓缩后得桑葚粗提液,利用HPLC-Q-TOF-MS对桑葚粗提液中主要的活性物质进行结构鉴定,用桑葚粗提液干预NP染毒大鼠模型[对照组:玉米油,桑葚组:120 mg/(kg·bw),NP染毒组:270 mg/(kg·bw),桑葚低、中、高干预组:NP灌胃剂量均为270 mg/(kg·bw)桑葚干预剂量分别为30、60、120 mg/(kg·bw)],利用OFT和EPM来观察桑葚粗提液对NP神经行为毒性的干预效果,以Nrf2信号通路为主,结合桑葚粗提液对NP染毒大鼠甲状腺功能和单胺类神经递质的影响,探讨桑葚粗提液对NP染毒大鼠的解毒机制。所以数据采用SPSS19.0进行分析。主要研究结果如下:(1)NP对大鼠一般毒性作用:与对照组相比,高剂量染毒组大鼠体重增长显著减缓(P<0.01),食物利用率显著下降(P<0.01),各剂量染毒组大鼠肝脏系数、肾脏系数显著增大(P<0.01);(2)NP对大鼠神经行为毒性作用:染毒前,各组OFT和EPM的各项指标均无显著性差异(P>0.05)。染毒后,高剂量染毒组大鼠进入中央区域的距离和进入中央区域的次数显著少于对照组(P<0.05),高剂量染毒组大鼠进入开臂时间(OT)、进入开臂时间百分比(OT%)、进入开臂次数(OE)、进入开臂次数百分比(OE%)亦均显著少于对照组(P<0.01或P<0.05);(3)NP对甲状腺功能及单胺类递质的影响:高剂量染毒组大鼠血清中游离三碘甲状腺原氨酸(FT3)和游离甲状腺素(FT4)的水平显著降低(P<0.05),反三碘甲状腺原氨酸(r T3)的水平显著升高(P<0.05),各剂量染毒组大鼠血清促甲状腺素(TSH)水平极显著升高(P<0.01),高剂量染毒组大鼠肝脏脱碘酶Ⅰ(DIOⅠ)和脱碘酶Ⅱ(DIOⅡ)的活性显著升高(P<0.05),各剂量染毒组大鼠肝脏脱碘酶Ⅲ(DIOⅢ)活性均极显著升高(P<0.01);各剂量染毒组大鼠下丘脑中5-羟色胺(5-HT)、去甲肾上腺素(NE)和多巴胺(DA)的水平显著升高(P<0.05或P<0.01),高剂量染毒组大鼠下丘脑单胺氧化酶(MAO)的活性显著下降(P<0.05);(4)桑葚粗提液成分分析及结构鉴定:桑葚粗提液中蛋白质占0.38%,总糖占4.96%,其中包括2.36%的还原糖,水分含量为90.18%,多酚含量为3.49%,黄酮含量为0.74%;经过质谱分析,桑葚粗提液中含有矢车菊-3-葡萄糖苷、芦丁、白藜芦醇、槲皮素等天然活性成分;(5)桑葚粗提液对NP染毒大鼠一般毒性的影响:中、高剂量干预组大鼠总食物利用率显著高于染毒组(P<0.05或P<0.01),中、高剂量干预组大鼠肝脏系数显著低于染毒组(P<0.05);(6)桑葚粗提液对NP染毒大鼠神经行为毒性干预作用:染毒前,各组OFT和EPM的各项指标均无显著性差异(P>0.05)。染毒后,高剂量干预组大鼠进入中央区域距离和进入中央区域的次数显著高于染毒组(P<0.05),高剂量干预组大鼠OT、OT%、OE和OE%显著高于染毒组(P<0.05或P<0.01);(7)桑葚粗提液对NP染毒大鼠甲状腺功能和单胺类递质的干预作用:高剂量干预组大鼠血清FT3水平显著高于染毒组(P<0.05),各剂量干预组大鼠血清FT4水平显著高于染毒组(P<0.05或P<0.01),高剂量干预组大鼠血清r T3和TSH水平显著低于染毒组(P<0.05),高剂量干预组大鼠肝脏DIOⅢ活性显著低于染毒组(P<0.05);高剂量干预组大鼠下丘脑5-HT和DA的水平显著低于染毒组(P<0.05),中剂量干预组大鼠下丘脑DA水平显著低于染毒组(P<0.05),高剂量干预组大鼠下丘脑MAO的活性显著高于染毒组(P<0.05);(8)桑葚粗提液对NP染毒大鼠核因子相关因子2(Nrf2)及其下游Ⅱ相解毒酶的干预作用:高剂量干预组大鼠肝脏谷胱甘肽硫转移酶(GST)及尿苷葡萄糖醛酸转移酶(UGT2b1)的活性显著高于染毒组(P<0.05),与染毒组相比,桑葚高剂量干预组极显著上调肝脏Nrf2 m RNA、GST m RNA、UGT2b1 m RNA的表达(P<0.01),桑葚中剂量干预组显著上调肝脏GST m RNA的表达(P<0.05)。以上结果表明,NP有可能是通过引起甲状腺功能减退和影响下丘脑单胺类神经递质的水平而产生焦虑症,而桑葚粗提液则可能是通过Nrf2信号通路诱导Ⅱ相解毒酶的活性及改善NP染毒对甲状腺功能和单胺类神经递质的影响以达到解毒的目的。