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研究背景：实体器官移植已经成为终末期器官功能衰竭重要的治疗手段。尽管HLA配型以及免疫抑制剂的治疗,急性排斥反应仍然是决定长期移植肾功能和肾移植患者存活率的一个关键因素。因此,及时诊断和治疗排斥反应是移植后监视一个重要的目标。血肌酐检测和移植后肾脏功能障碍组织活检意味着急性排斥反应已经发生,因此,快速非侵入性预测排斥反应标志物对于改善移植病人的管理是必需的。肿瘤坏死因子受体(TNFR)／肿瘤坏死因子(TNF)超家族成员可以控制免疫功能的不同方面。在过去10年的研究表明,这个家族中最重要和最突出的一对相互作用的共刺激分子是OX40(CD134)及OX40L(CD252)。最近的研究表明,通过分子OX40共刺激受体信号,可以增加CD4和CD8T细胞膨胀、分化和记忆细胞的生成。目的：本课题目的是研究是否共刺激分子OX40、OX40L mRNA能够提供一个预测急性移植排斥反应的简单、安全、无创分子标记物,同时为寻找诱导和维持移植耐受的新方法提供理论依据。方法：第一部分：收集天津市第一中心医院东方器官移植中心行肾移植手术的终末期肾病患者40例,其中移植肾活检病理检查证实急性排斥患者20例为急性排斥组,移植后肾功能正常非排斥患者20例为非排斥组。正常对照组为20例健康个体。应用TaqMan实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)技术定量检测肾移植急性排斥组、非排斥组和正常对照组新鲜外周血单个核细胞(PBMCs)中OX40、OX40L mRNA基因水平,比较各组间的差异及其在急性排斥反应中的预测价值。第二部分：应用流式细胞术检测肾移植急性排斥组和非排斥组新鲜外周血T辅助(Th)1细胞(CD4+IFN-y+)、Th2细胞(CD4+IL-4+)以及Th3细胞(CD4+TGF-β+),比较Th细胞与OX40、OX40LmRNA之间的相关性。第三部分：应用流式细胞术定量分析肾移植及肝移植受者T淋巴细胞表面CD38、CD95分子表达量。第四部分：分离急性排斥患者新鲜外周血PBMCs,分成2组,①单纯刺激组,加入抗CD3单抗2μg/mL,②重组人OX40-IgGl融合蛋白组,加入(抗CD3单抗2μg/mL+重组人OX40-IgG1融合蛋白10μg/mL)。37℃,5%C02饱和湿度的条件下培养48小时,应用酶联免疫吸附实验(ELISA)分别测定培养上清液中Thl、Th2细胞因子的表达水平。结果：第一部分：肾移植术后急性排斥组外周血PBMCs OX40mRNA水平明显高于非排斥组以及正常对照组(P<0.001),非排斥组外周血PBMCs OX40mRNA水平与正常对照组之间无统计学差异(P=0.585)。肾移植术后急性排斥组外周血PBMCs OX40L mRNA水平明显高于正常对照组(P=0.016),急性排斥组外周血PBMCs OX40L mRNA水平与非排斥组之间无统计学差异(P=0.305),非排斥组与正常对照组之间无统计学差异(P=0.153)。OX40以及OX40L在诊断急性排斥反应的ROC曲线下面积(AUC)分别为0.929(0.860-0.997,P<0.001)、0.638(0.485-0.791, P=0.083)。从ROC曲线下面积可见外周血PBMCs OX40mRNA基因水平对于急性排斥反应的预测价值较高。以7.5x106拷贝/μL为诊断界值,OX40mRNA基因水平诊断急性排斥的灵敏度、特异度、阳性预测值(PPV)及阴性预测值(NPV)分别为80%、92.5%、84.2%、90.2%；以4.2x103拷贝/μL为诊断界值,OX40L mRNA基因水平诊断急性排斥的灵敏度、特异度、PPV及NPV分别为40%、77.5%、47%、72.1%。急性排斥组OX40、OX40L mRNA基因水平与血清肌酐浓度之间无相关性。第二部分：非排斥组Thl细胞(CD4+IFN-y+)、Th2细胞(CD4+IL-4+)以及Th3细胞(CD4+TGF-p+)与正常对照组相比差异无显著性(P=1.000)。急性排斥组Thl细胞(CD4+IFN-γ+)明显高于非排斥组和正常对照组(P<0.01)。急性排斥组Th2细胞(CD4+IL-4+)以及Th3细胞(CD4+TGF-β+)与非排斥组相比差异无显著性(P值分别为0.307、0.990)。急性排斥组OX40、OX40L mRNA基因水平与Thl细胞之间显著相关。第三部分：肾移植及肝移植急性排斥组外周血淋巴细胞表面CD95+CD3+分子表达水平明显高于非排斥组以及正常对照组(P<0.01)。非排斥组外周血淋巴细胞表面CD95+CD3+分子表达水平与正常对照组之间无统计学差异(P>0.05)。肾移植急性排斥组外周血淋巴细胞表面CD38+CD8+分子表达水平明显高于正常对照组(P<0.05),急性排斥组CD38+CD8+分子表达水平与非排斥组之间无统计学差异(P>0.05)。肝移植急性排斥组外周血淋巴细胞表面CD38+CD8+分子表达水平与非排斥组、正常对照组之间无统计学差异(P>0.05)。第四部分：急性排斥患者PBMCs加入重组人OX40-IgG1融合蛋白组体外培养48小时后上清液中IFN-γ、IL-4浓度与加入抗人CD3单抗单纯刺激组相比显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论：1、本研究第一次显示OX40、OX40L mRNA基因水平与肾移植术后急性排斥反应相关。外周血OX40mRNA基因水平可能成为预测肾移植术后急性排斥反应的一个安全、无创分子标志物。2、急性排斥患者共刺激分子OX40、OX40LmRNA水平上调同时引起Th1细胞增加,参与肾移植急性排斥反应的发生。3、CD38、CD95分子参与了移植术后急性排斥反应的免疫过程。4、体外阻断OX40/OX40L共刺激通路可能为我们提供更好的临床干预和治疗急性排斥的方法和途径。