紫红丝膜菌菌种发酵次级代谢产物及其抗菌活性研究

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紫红丝膜菌(Cortinarius rufo-olivaceus(Pere.)Fr.)是主要生长在我国宁夏回族自治区和内蒙古自治区贺兰山上的一种非常稀有的大型可食用野生真菌资源。有研究报道该菌的次级代谢产物具有丰富的生物活性。但生于贺兰山上的大型真菌种类丰富,形态学特征相似,根据形态特征分类不够准确。且关于紫红丝膜菌的次级代谢产物和生物活性的研究目前全部集中在其子实体上。本实验运用表型分类法和基因型分类法两种方法对紫红丝膜菌进行了鉴定。并分离了紫红丝膜菌的菌种,通过对比筛选出最合适的培养基对其进行批量发酵培养,利用离心、抽滤、萃取及各种色谱技术将所得发酵液和菌丝分别进行提取分离,利用各种波谱技术对所得单体化合物进行结构鉴定。同时,对比了紫红丝膜菌子实体次级代谢产物与菌种发酵培养条件下次级代谢产物的异同,并对菌种发酵产物的各萃取物进行了抗菌活性测试,最终得到如下结果:1、通过对比文献中所描述的紫红丝膜菌的形态特征确定所采集到的大型真菌为紫红丝膜菌,利用ITS测序方法对其加以鉴定显示其与Cortinarius rufo-olivaceus TUB 011463具有99.57%的同源性进一步确定了该菌为紫红丝膜菌。2、对紫红丝膜菌的培养基配方进行筛选,并将菌种发酵产物与子实体提取物进行化学成分比较。最终选出最合适的培养基为燕麦汁培养基,紫红丝膜菌在该培养基下次级代谢产物最为丰富,也最接近子实体的次级代谢产物。3、通过对紫红丝膜菌发酵产物乙酸乙酯相的分离纯化,共分离得到了18种化合物,鉴定了其中15个化合物的结构,包含3种甾体类化合物和12种蒽醌类化合物。15个化合物均是首次从紫红丝膜菌发酵产物中分离得到,其中Cr-14是新的天然产物,Cr-7是首次在丝膜菌属中分离得到的,Cr-1、Cr-2、Cr-4、Cr-10、Cr-12和Cr-13在紫红丝膜菌的子实体中也有报道,但化合物Cr-3、Cr-5、Cr-9和Cr-15在紫红丝膜菌子实体次级代谢产物中未见报道。证明通过菌种发酵的方式不仅可产生部分与子实体相同的化学成分,也可以产生新的化合物。4、对紫红丝膜菌发酵产物的萃取物进行对植物病原菌的抗菌活性测试结果表明其次级代谢产物的粗提物对灰霉病菌和稻瘟病菌有不同程度的抗菌活性,其中乙酸乙酯相对灰霉菌的抑制作用最为明显。综上所述,本研究在紫红丝膜菌的子实体中分离得到菌种,通过ITS测序证明该菌与Cortinarius rufo-olivaceus TUB 011463具有99.57%的同源性,进一步确定其分类学地位。以该菌种为研究对象,从其燕麦汁培养基菌种发酵产物中分离到了18个单体化合物,其中6个也曾报道在子实体提取物中分离得到,为以菌种发酵的方式实现化合物的量化生产提供了理论基础。而其菌种发酵产物的生物活性有待更进一步研究。
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