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目的:颅内出血(intracranial hemorrhage,ICH)是新生儿期常见病,与这一阶段自身的解剖生理特点和多种围产期高危因素有关,其中生发基质-脑室内出血(germinal matrix-intraventricular hemorrhage,GM-IVH)是早产儿最常见的ICH类型,胎龄愈小发病率越高,是影响早产儿救治,导致早产儿死亡,甚至存活者预后不良的主要原因之一。近年来,由于医学技术的进步,尤其新生儿重症监护病房(NICU)设备与医疗护理水平的提高,早产儿GM-IVH的发生率已下降至约2.21%,但34周以下早产儿GM-IVH发生率仍高达24.1%,重度GM-IVH容易合并脑室周围白质损伤、脑室周出血性梗死等并发症,往往遗留小儿神经系统后遗症,目前尚无有效治疗方法。海马体作为大脑边缘系统的重要组成部分,与脑室系统密切相关,主要负责学习和记忆,是GM-IVH后潜在脑损伤部位,且海马体病变与多种神经精神疾病密切相关。目前大部分研究仍局限于脑室周围白质损伤,而鲜有报道GM-IVH是否对海马体造成损伤。本文试图通过动物模型探讨:(1)早产兔GM-IVH后海马体细胞凋亡相关蛋白的表达水平;(2)去铁胺(Deferoxamin,DFX)干预治疗对上述相关蛋白表达的影响;方法:1选择孕29天孕兔进行剖宫产(足月为孕32天),迅速取幼兔,共36只,给予保温、早产儿奶粉喂养。将所有幼兔随机分为对照组、GM-IVH模型组(简称模型组)、GM-IVH模型+DFX干预组(简称治疗组),每组各12只。参照腹腔注射丙三醇诱发GM-IVH的方法,模型制备方法如下:于生后3小时内给早产兔腹腔注射50%丙三醇,剂量为10ml/kg。于注射丙三醇2小时后,治疗组给予腹腔注射DFX,药物浓度为50mg/ml,给药总剂量为100mg/(kg·d),24小时内分两次给药,其他两组给予等量生理盐水。24小时后行颅脑超声筛查观察出血情况,剔除模型组、治疗组中未发生GM-IVH早产兔,和对照组中自发GM-IVH的早产兔。2将以上三组剩余早产兔(每组各10只)于生后48h腹腔注射2%戊巴比妥钠(40mg/kg)麻醉,断头,于冰上迅速剥离脑组织。从前囟开始,剥离头顶骨片,海马体位于大脑皮层(cerebral cortex)底部,用直镊小心地将大脑皮层拨开,分离出海马体,用PBS(磷酸盐缓冲液)洗净,一半浸入4%多聚甲醛林中进行固定,用于HE染色、免疫组化,另一半置于-80℃冰箱冷冻,用于免疫印迹(Western Blot)检测。3光镜下观察海马CA1区神经元的形态学变化;用免疫组织化学染色观察肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)的蛋白表达;Western Blot检测TNF-α和caspase-3的蛋白表达水平。4统计方法:采用SPSS17.0统计学软件、Microsoft Excel 2003处理数据,计量资料若符合正态分布以均数±标准差表示。检验方差齐性,若方差齐,样本均数间的两两比较比较采用LSD-t法检验;若方差不齐采用秩和检验,P<0.05有统计学意义。结果:1成功复制了早产兔GM-IVH模型对孕29天的孕兔行剖宫产,成功获得早产兔。通过新生兔颅脑超声和大体标本证实早产兔GM-IVH模型的成功建立。2各组早产兔海马体CA1区神经细胞HE染色结果对照组早产兔大脑海马体CA1区锥体神经细胞排列紧密,结构清晰,胞体呈椎体,胞核大且圆,核仁明显;模型组早产兔大脑海马体CA1区锥体神经细胞排列稀疏,细胞间隙扩大,胞体缩小,胞核浓染,部分细胞结构破坏甚至崩解;治疗组早产兔大脑海马体CA1区锥体神经细胞排列稍稀疏,部分细胞间隙稍有扩大,细胞数量介于对照组与模型组之间,细胞结构基本正常。3免疫组织化学检测海马体CA1区TNF-α和caspase-3蛋白表达情况对照组早产兔海马体CA1区可见丰富的神经细胞,仅见少量的胞质或胞核呈棕色的阳性细胞,染色程度较浅;与对照组相比,模型组早产兔海马体CA1区神经细胞数目明显减少,排列稀疏,TNF-α和caspase-3阳性细胞的数量明显增多,染色程度较深,为深棕色,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组相比,治疗组早产兔海马体CA1区TNF-α和caspase-3阳性细胞的数量减少,染色程度较模型组浅,差异有统计学意义(P<0.05)。4 Western Blot检测海马体TNF-α和caspase-3蛋白表达水平对照组早产兔海马体TNF-α、caspase-3蛋白表达较低;与对照组相比,模型组早产兔海马体TNF-α、caspase-3蛋白表达于GM-IVH后升高,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组相比,治疗组早产兔海马体TNF-α、caspase-3蛋白的表达降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:1早产兔发生GM-IVH后,海马体CA1区神经细胞数量减少、细胞结构破坏,提示早产兔GM-IVH后对海马体造成损伤;2早产兔发生GM-IVH后,海马体内TNF-α、caspase-3表达量增加,差异有统计学意义(P<0.05),提示细胞凋亡机制参与了GM-IVH后海马体的损伤过程;3经去铁胺治疗后,早产兔GM-IVH海马体TNF-α、caspase-3蛋白表达水平下降,差异有统计学意义(P<0.05),提示去铁胺可以减轻GM-IVH后海马体的损伤。