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α-酮基丁酸是合成多种有用化合物的前体物质,如L-异亮氨酸、L-高丙氨酸及一些食品添加剂等,被广泛应用于医药和食品添加行业。本文以苏氨酸高产菌E.coli THRD为出发菌株,以代谢工程理论为指导,成功构建了α-酮基丁酸基因工程菌株。首先在THRD基础上,过量表达解除L-异亮氨酸反馈抑制的苏氨酸脱水酶,使大肠杆菌具备了积累α-酮基丁酸的能力,菌株THRW摇瓶发酵产量为13.41 g/L,但在发酵液中检测到大量的前体物苏氨酸和副产物丙酮酸。为减弱前体物的外排能力,分别缺失苏氨酸输出蛋白RhtA和Rht