目的:本课题通过建立鸟分枝杆菌感染巨噬细胞,观察鸟分枝杆菌在不同时间段感染时巨噬细胞表面关键受体TLR2和TLR6以及相关细胞因子TNF-α的含量变化,然后通过封闭巨噬细胞内TLR2和TLR6的表达,检测与凋亡有关的细胞因子TNF-α的含量变化以及与凋亡有关的关键蛋白Bax和Bcl-2以及凋亡率的变化,为阐明鸟分枝杆菌感染巨噬细胞的机制提供依据。方法:利用鸟分枝杆菌感染巨噬细胞构建鸟分枝杆菌感染组模型;感染时间分为0小时,8小时,16小时,24小时,48小时5个时间段,提取细胞内总蛋白,利用WB技术检测随着感染时间的增加细胞内总蛋白中关键细胞受体TLR2以及TLR6的含量的变化情况;提取细胞外上清液,利用ELISA技术检测随着感染时间的增加关键细胞因子TNF-α含量的变化情况。再次建立鸟分枝杆菌感染模型,加入TLR2和TLR6的单克隆抗体来抑制巨噬细胞内两种受体的表达量,然后将实验分为5组,1.单独巨噬细胞组;2.鸟分枝杆菌感染组;3.加入TLR2单克隆抗体的感染组;4.加入TLR6单克隆抗体的感染组;5.同时加入两种单克隆抗体的感染组,利用ELISA技术检测关键细胞因子TNF-α与两种受体表达量的关系,利用WB技术检测两种凋亡关键蛋白,促凋亡蛋白BAX和抑凋亡蛋白BCL-2表达量的变化与两种受体的关系,利用流式细胞仪检测凋亡率的变化与两种受体的关系。结果:建立鸟分枝杆菌感染组后,感染时间在0h-24h的区间内,TLR2的含量是逐渐增加,在24h-48h区间内,TLR2的含量逐渐减少;感染时间在0h-24h的区间内,TLR6的含量是逐渐增加,在24h-48h区间内,TLR6的含量逐渐减少;与上述两种受体含量变化情况类似,感染时间在0h-24h的区间内,TNF-α的含量是逐渐增加,在24h-48h区间内,TNF-α的含量逐渐减少。随后检测两种受体的表达量与凋亡是否有关,在TNF-α含量的变化检测中,3组和4组的含量较之2组有减少,5组较之前面几组的表达量有程明显下降趋势,在促凋亡蛋白BAX的表达量变化和凋亡率变化中,3组和4组的含量较之2组有减少,5组较之前面几组的表达量呈明显下降趋势,在抑凋亡蛋白BCL-2表达量的变化中,3组和4组的含量较之2组有增加,5组较之前面几组的表达量呈明显程度增加趋势。结论:TLR2和TLR6与巨噬细胞凋亡相关,鸟分枝杆菌可通过促进TLR2和TLR6的表达来影响相关凋亡通路,从而诱导巨噬细胞凋亡。