梅花鹿锯茸后创口部位肽聚糖识别蛋白1(PGLYRP1)分布研究

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鹿茸是鹿类动物着生于头骨的重要附属器官,具有周期性脱落、生长和骨化迅速等特点,其不同生长阶段的不同药用价值促使其成为我国传统的名贵药材。尽管鹿茸或鹿角脱盘具有诸多功能,但是其众多功能机理、特别是鹿角脱盘中的效应分子的表达和分布及机制尚不明确。肽聚糖识别蛋白1(PGLYRP1)是一种存在于中性粒细胞的天然免疫蛋白,可入侵微生物的细胞壁,并在抗菌防御、炎症和疾病中发挥重要作用。部分研究表明,鹿角脱盘中存在PGLYRP1,且提纯后的PGLYRP1对革兰氏阴性菌具有抑制作用。为了明确PGLYRP1蛋白在鹿茸创口的分布特点,评估锯茸后梅花鹿机体的炎症及其变化,以及肽聚糖处理是否会引起炎症状况的变化和PGLYRP1蛋白的分布,本研究利用酶联免疫吸附实验(Elisa)和免疫组织化学染色技术检测梅花鹿锯茸后急性期蛋白含量的变化以及PGLYRP1的分布状况,来分析肽聚糖处理是否会引起炎症状况的变化以及PGLYRP1的分布规律,得到如下结果:1、梅花鹿锯茸期血清中五种急性期蛋白均存在较大的浓度分布范围,个体差异明显,不同处理方法未能引起急性期蛋白显著变化,但部分蛋白在0-6 d具有相似的变化趋势。2、对比不同组织脱钙液对鹿角脱盘、鹿角柄脱钙效果的影响,脱钙液Ⅰ具有对组织损伤小、HE染色清晰、对比度高的优点,但缺点是脱钙时间长,而脱钙液Ⅶ虽HE染色相对低于脱钙液Ⅰ,但具有脱钙快、对组织损伤小等特点。因此,若不考虑时间的情况下,建议使用脱钙液Ⅰ进行脱钙,对组织损伤小,HE染色效果最好。若综合脱钙时间及脱钙效果,建议选择脱钙液Ⅶ,脱钙时间短,对组织损伤较小,HE染色效果较好,适合用于鹿角脱盘及鹿角柄脱钙。3、通过对骨化程度逐渐增高的0 d茸尖、茸尖下部及22 d创口部位的免疫组化染片结果分析可知,PGLYRP1在鹿茸尖几乎没有表达或表达较少;在茸尖下部骨间隙及软骨间隙中PGLYRP1有一定量的表达,表达比较分散;在22 d创口部位骨间隙中表达量较高,且表达比较集中。因此,本研究认为PGLYRP1主要分布于鹿茸创口部位骨间隙中,在骨小梁中没有分布,PGLYRP1随着骨化程度增加含量逐渐升高,肽聚糖处理未引起创口部位PGLYRP1分布差异,梅花鹿血清中急性期蛋白浓度范围较大。
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