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多发性硬化(Multipie sclerosis,MS)是一种获得性、免疫介导的慢性中枢神经系统脱髓鞘疾病,多为青壮年发病,常致神经功能残畸。最令人困惑的是作为治愈反应的髓鞘再生却是不充分的,随着疾病的进展,脱髓鞘的病损数目却保持增长,并明显导致临床病情的恶化。因而在临床上,它难于诊断、处理和治疗。 目的:观察移植外源性髓鞘形成细胞的疗效,以及低氧、细胞因子等对移植细胞O2A细胞(Oligodendrocyte-type 2-astrocyte cell)体外增殖的影响,为临床治疗MS做一些必要的探索。 方法:1.初步探讨低氧和/或细胞因子对O2A细胞体外增殖的作用:(1)体外培养O2A细胞,进行纯化和鉴定;(2)持续3%低氧:低氧培养O2A细,胞1h、2h、3h、4h、8h、12h、24h、48h和72h后取出,恢复常氧培养至9d;间歇3%低氧:将培养2d的O2A细胞每天分别低氧处理1h、2h、3h、4h,连续1-4d,恢复常氧培养至9d。(3)利用细胞记数法和MTT法检测低氧和/或细胞因子(PDGF,bFGF,IL-6,IFN-β1,GDNF及它们的某些组合)对O2A细胞的增殖作用;(4)用RT-PCR的方法检测了低氧诱导因子(HIF-1α)在低氧O2A细胞中的表达变化。2.动物分组:正常对照组、EAE组、EAE+细胞移植组、EAE+假手术组和成瘤组;C57BL/6J小鼠(雌性,4-6周)30只,随机分成每组6只小鼠。对急性EAE模型给予O2A细胞移植治疗,通过神经功能评分及病理学(包括HE和FITC、BrdU、Gal-C、O4、A2B5的免疫组化)观察治疗效果。 结果:1.重复间歇性低氧(尤其每次3h,重复3次)可促进O2A细胞的增殖,而超过24h低氧抑制O2A细胞的增殖;2.细胞因子IFN-β1、IL-6、PDGF、bFGF、GDNF以及它们之间的某些组合,可促进O2A细胞增殖,其中PDGF+bFGF组以及IL-6同它们的组合作用尤为明显;3.O2A细胞移植治疗可改善急性EAE模型小鼠的神经功能评分;4.移植后病理显示:病损明显恢复,