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抗寒梨种质资源是寒地果树资源的宝贵财富,对其深入研究有利于今后更科学有效的保存与利用。本试验主要以RAPD(随机扩增多态性DNA)分子标记为主要研究方法。对抗寒梨种质资源遗传多样性进行研究,揭示不同种间的亲缘关系及其分类地位;寻找不同种质的特有RAPD标记,为今后的种质鉴定、育种亲本选择及其杂交后代性状预测、早期选择提供研究依据;并初步构建抗寒梨的核心种质,便于资源的高效管理及遗传多样性的准确利用。主要研究内容如下:1用SDS方法,提取了梨基因组DNA,并对提取液成分进行了改进,提高DNA的质量和产量。2优化了RAPD反应体系。所得最优反应体系为:反应体积25μl其中模板DNA20ng/μl,引物1.0μl浓度10pM,TaqDNA聚合酶1.0U,dNTP0.2mmol/L,PCR Buffer(含Mg2+)2.5μl。扩增程序为:预变性94℃4min,变性94℃45s,退火温度(37℃)45s,72℃延伸120s,共35个循环后,在72℃继续延伸5min,然后在4℃保存。3利用RAPD技术对抗寒梨107份种质资源遗传变异进行了研究,从180个10bp随机引物中筛选出13个多态性引物用于正式扩增,共扩增出105条DNA带,其中多态性DNA带99个,多态性百分比达到94.3%。平均每个引物扩增的DNA带数目为8条。4有6份资源扩增出了一个以上的特有RAPD标记,据此可以进行资源鉴定或以此亲本的杂交后代早期选择。5利用DNA扩增结果构建了初级核心种质84份,并对其进行再聚类分析,得到结论如下:①验证了前人对秋子梨系统、白梨系统、西洋梨系统的经典分类。但一些野生种的亲缘关系与经典分类学存在差别,待进一步深入研究。②通过聚类分析树状图及苹果梨和其他品种的相似系数表明:苹果梨和白梨系统的品种聚在一起,虽然在表型性状是白梨和砂梨的杂和体,显示出苹果梨与白梨有较近的亲缘关系,在分类地位上应归属于白梨系统。6首次尝试对抗寒梨种质资源进行核心种质构建,获得28份核心种质,并对核心种质的多样性和实用性进行了检验。以上研究为抗寒梨种质资源的保护、利用奠定了分子标记研究的理论基础,同时,为进一步构建抗寒梨遗传连锁图谱、分子标记辅助育种、重要基因的图位克隆等奠定了基础。将对抗寒梨的分子遗传研究产生重要影响。