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第一部分磷酸化smad2(P-smad2)、磷酸化smad3(P-smad3)在瘢痕疙瘩及正常皮肤组织中表达水平差异的研究目的:使用免疫组化分析磷酸化smad2(P-smad2)、磷酸化smad3(P-smad3)蛋白在瘢痕疙瘩及正常皮肤组织中的表达差异。方法:收集48例经手术切取的瘢痕疙瘩组织及48例正常皮肤组织。免疫组化检测P-smad2及P-smad3,在200倍和400倍镜下观察这两种蛋白的表达分布情况。结果:在瘢痕疙瘩组织中,P-smad2及P-smad3蛋白的阳性率均高于正常皮肤组织(p<0.05)。结论:P-smad2及P-smad3蛋白在瘢痕疙瘩组织中高表达,与正常皮肤表达水平的差异提示它们可能参与了瘢痕疙瘩的形成,为后续相关药物治疗机理的研究提供了一定基础。第二部分瘢痕疙瘩及正常皮肤组织成纤维细胞的体外培养与5-氮杂-2-脱氧胞苷对该成纤维细胞的生长周期及凋亡的影响目的:原代提取并培养足够数量的瘢痕疙瘩及正常皮肤组织成纤维细胞,使用甲基化抑制剂5-氮杂-2-脱氧胞苷进行干预,流式细胞学分析瘢痕疙瘩组织成纤维细胞细胞周期及凋亡的变化。方法:组织块培养法培养瘢痕疙瘩及正常皮肤组织,获得的成纤维细胞使用5-氮杂-2-脱氧胞苷进行干预,流式细胞学分析细胞增殖、细胞周期及细胞凋亡。结果:培养的瘢痕疙瘩及正常皮肤组织块约7天可观察到成纤维细胞从中“爬出”。14天后细胞可长满整个培养瓶(规格:50毫升)。5-氮杂-2-脱氧胞苷干预后,瘢痕疙瘩成纤维细胞处于G0/G1期的比例增加,细胞凋亡也较对照明显增多。正常皮肤成纤维细胞于药物干预前后未发现显著变化。结论:5-氮杂-2-脱氧胞苷干预后,瘢痕疙瘩成纤维细胞处于G0/G1期的比例增加,细胞凋亡也较对照明显增多,表明5-氮杂-2-脱氧胞苷能够有效抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖,并促进其凋亡。第三部分5-氮杂-2-脱氧胞苷对体外培养的瘢痕疙瘩成纤维细胞相关因子的影响目的:研究5-氮杂-2-脱氧胞苷体外干预瘢痕疙瘩及正常皮肤组织成纤维细胞后,TGF-β/Smad信号通路相关蛋白的表达变化。方法:凝胶电泳PCR检测瘢痕疙瘩及正常皮肤组织成纤维细胞在5-氮杂-2-脱氧胞苷干预前后胶原蛋白I(Coll-Ⅰ)的mRNA表达变化,Westernblot检测各组P-smad2、P-smad3、TGF-β1、smad7、Coll-Ⅰ蛋白的表达变化。结果:5-氮杂-2-脱氧胞苷干预后,瘢痕疙瘩成纤维细胞的Coll-ⅠmRNA表达下降,P-smad2、P-smad3、TGF-β1、Coll-Ⅰ蛋白表达下降,smad7蛋白表达回升。而正常皮肤成纤维细胞在药物干预前后无明显差异。结论:5-氮杂-2-脱氧胞苷作用瘢痕疙瘩成纤维细胞后,TGF-β/Smad信号通路中TGF-β1表达减少,抑制型smad因子smad7表达增多,抑制了smad2及smad3的磷酸化(P-smad2、P-smad3表达下降)。该信号通路的抑制最终导致瘢痕相关性胶原蛋白合成减少。