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马铃薯是仅次于水稻、小麦、玉米的世界第四大粮食作物。我国是马铃薯生产的大国,种植面积与产量均居世界第一,但我国的马铃薯产业基本还处于一种自发的无序状态,与国外种薯质量差异巨大,各种马铃薯病害发生情况严重。因此从马铃薯生产强国引种高品质马铃薯成为提升我国马铃薯产业的重要途径和手段。依据FAO和IPPC的相关规定,通过引种前的有害生物风险分析,可以科学有效的降低引种带来的各种风险和危害,保护本国农业生产、生态安全。目前在马铃薯上已发现的病毒、类病毒多达30余种,病毒病的发生和传播严重制约了马铃薯的生产。建立快速、准确、灵敏的病毒检测方法可以最大程度的确保引种马铃薯的种薯质量,控制马铃薯病毒病的传播。本研究通过有害生物风险分析对从法国、荷兰、俄罗斯引种马铃薯种薯进行了合理的风险预测,并确立了科学有效的风险管理措施,降低了引种风险;同时建立了马铃薯病毒的单重、双重、多重反转录聚合酶链式反应检测体系。根据FAO制定的《有害生物风险分析准则》,从传播途径开始进行有害生物风险分析,初步提出了法国、荷兰、俄罗斯三国进境马铃薯种薯上的有害生物种类和数量,其分别为179种、152种、142种。根据有害生物的地理分布、官方控制、经济重要性、种薯传带的可能性等综合指标进行初步评估,筛选出进境马铃薯种薯潜在的限定有害生物(PRP)和非限定有害生物(NRP)。对进境马铃薯种薯潜在的PRP,根据有害生物传入、定殖、扩散的可能性以及潜在的影响等进行详细的风险评估,确定了各国进境马铃薯上潜在的检疫性有害生物(QP)和限定的非检疫性有害生物(RNQP)。分析确定法国QP共14种、RNQP共23种;荷兰QP共26种、RNQP共26种;俄罗斯QP共21种、RNQP共17种。依据风险分析结果,选取3种有较高引种风险的马铃薯病毒——马铃薯M病毒(PVM)、番茄斑萎病毒(TSWV)、马铃薯纺锤块茎类病毒(PSTVd)进行RT-PCR检测。利用试剂盒法、RNAiso Plus试剂法提取马铃薯病毒RNA,结果表明两者提取的RNA纯度高且完整性较好,满足RT-PCR检测的要求。根据NCBI报道的病毒全基因组序的保守区域序列设计了PVM、TSWV、PSTVd特异性引物对,采用单重RT-PCR对3种马铃薯病毒进行了扩增,扩增片断大小分别为630bp(PVM)、747bp(TSWV)、251bp(PSTVd)。回收3种病毒的单重扩增产物并测序,经NCBI BIAST同已报道的病毒序列比对,证明PVM、TSWV、PSTVd的RT-PCR扩增靶带序列完全正确。试验从反转录下游引物量、Mg2+浓度等方面对单重、双重和多重RT-PCR体系检测马铃薯病毒进行了探索和优化。